[讨论帖]这什么做出现这种情况，帮忙分析一下！

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• 969 (2011-11-23 10:45:54)

  图2 是该方法的标准图谱
  

  
  44186102.jpg

• 969 (2011-11-23 10:46:14)

  流动相：Solution A: Acetonitrile, stabilizer-free tetrahydrofuran, and Buffer (21:12:67) Solution B: Acetonitrile, stabilizer-free tetrahydrofuran, and Buffer (61:12:27)

  
  65307170.jpg

• 木槿 (2011-11-23 10:46:43)

  遇到这样的问题，不知道从何说起，咱们还是从头说起，重在讨论，不在结果，因为某一环节的错误会导致下一阶段的走样，变形，扭曲。。。。。
  
  首先，理论知识
  
  我们在开展一项实验或试验，或是做某一个小小试验的时候，老师们，导师们，同学们都是从文献开始，从理论知识开始，就如同哲学一样，扯远了~~~~
  
  更何况现在这个知识爆炸时代，不，应该叫信息爆炸时代，想要弄清楚那个什么叫梯度，什么叫等度，梯度与等度的区别与联系，梯度设计需要注意什么，会遇到什么问题，该如何解决等等，应该说非常的多
  
  然后我们把这些或理论或别人的经验整理过来，结合我们在实验过程中遇到的问题，进行研究与分析，以及对比，发现这个大包好像是梯度峰，是不是梯度设计不合理，所选用的试剂是不是不理想，基线是不是不够好等等
  
  接着，咱们对那个液相性能简单了解，什么是四元泵，啥是二元泵
  
  以及对于那个些色谱知识也稍加掌握
  
  是不是就问题少很多。。。。。。
  
  当然我是说废话了，并不是针对楼主的哦
  
  我们都在学习，我们都是过来人，或许是我们没有碰到好的老师，好的同学，好的同事，好的论坛，好的资源，但是我们应该首先有好的心态
  
  相互学习共同进步！

• 二子 (2011-11-23 11:36:00)

  像是梯度洗脱溶剂变化引起的，换柱子或者换高纯度的溶剂试试

• 药徒 (2011-11-23 11:36:22)

  仪器性能的影响可能较大，比较简单的排除方法就是换台质量好点的仪器，这个问题也许就OK了。

• 131415 (2011-11-23 11:36:42)

  鬼峰”再现，建议你参考旧帖：http://analysis.dxy.cn/bbs/thread/16081540?keywords=鬼峰
  
  最快的办法就是换一台仪器看看效果。

• xevin (2011-11-23 11:37:05)

  个人觉得应该跟溶剂有关。梯度洗脱对流动相的要求还是比较高的~！~

• 刘白白 (2011-11-23 11:37:30)

  不进针，运行空白梯度看看，如果没有就是样品溶剂的问题
  
  还有就是梯度混合时的问题或试剂问题

• 火树银花nm (2011-11-23 11:37:54)

  偶遇到这样的情况时会换一下水，重新配个流动相，水在液相分析中很重要。
  空白一针不好时，走上两针，再进样品会好些。

• 8964357 (2011-11-23 11:38:17)

  
  个人认为仪器应该没有什么问题。流动相应该也没有什么问题，应该是柱子的问题，可以咨询一下标准图谱的试验工作者，看别人是用什么柱子做的。

• 66小飞侠 (2011-11-23 11:38:54)

  本身HPLC就是一个系统，任何一个环节出点问题，结果就跟楼主这样。
  
  逐个排除吧，流动相、溶剂、色谱柱、包括是泵高压还是低压梯度的影响？毕竟梯度洗脱出现这样的情况是常有的。

• 木槿 (2011-11-23 11:39:47)

  前段时间同事做液相：
  
  遇到了他认为不能解决的问题，其过程些出来与大家分享（如有雷同，纯属巧合）
  
  先说一下背景，此同事来了有一段时间，从其他单位过来的，对我怀疑有加，我承认，我能力确实不行，但是通过以前的3件事情，对我有所改善，于是遇到问题了，打电话过来问我：
  
  111过来看看吧，那个噪音怎么就这么大？
  
  我就屁颠屁颠过去了，因为我对问题比较好奇，同时有也有一定的责任（或许），发现问题确实如此，噪音较大，漂移不小，咱们做液相分析的其实经常或碰到此类问题，原因就不说了，都懂的(如果不懂的，也应该装懂，然后偷偷把问题弄清楚了，再看这个小故事)
  
  我同事怀疑是仪器的问题，这里说一下，很多人发现有异常了（能发现异常也不容易，很多）首先怀疑仪器设备，我觉得是不对的，当然你明确是仪器问题除外
  
  我察看了仪器设备，没有异常，我说我们来排查一下吧：
  
  你把流动相停掉，发现基线平稳
  
  你把柱子拿掉，流动相开着，发现基线基本平稳
  
  你把柱子接上，流动相开着，发现基线又大了！
  
  原因基本找到了，估计问题在色谱柱（我问他流动相有没有问题，他说绝对没问题，好姑且这样吧）
  
  第二天，我又去了，而且是在下午3点12分
  
  我问：问题找到了？我还按我的意思去排查了？
  
  我同事说还没来得及了
  
  为什么？
  
  冲柱子呢！
  
  那你为什么不晚上冲柱子呢？
  
  能用一种溶剂冲一夜吗？
  
  为什么不能用梯度的方法冲洗色谱柱？
  
  看我一眼，不说话
  
  你这峰怎么拖尾这么严重啊
  
  这个不是峰
  
  那是什么？
  
  那个峰要到8分钟
  
  哦，你说的是主峰吧，我问题你这是不是峰啊（等了一会儿，主峰出来了）
  
  怎么也是拖尾呢？
  
  不知道啊，峰面积不会这么低的啊
  
  我说出现峰面积低的原因有几个（至于几个，大家都懂的，如果不懂，偷偷学习之）
  
  （我于是又检查了一遍某个部位）
  
  最后把另外一个同事叫来了（那个同事之前做这个实验的）
  
  经过比对，就是我说的其中一个原因：他们在交接的过程中，色谱条件居然没有交接好！至于基线噪音的问题，基本是柱子问题了