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[求助]安捷伦氨基柱的使用

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2011-11-23 14:43    作者: vcve    来源: 分析测试百科网

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现在做一个品种阿卡波糖，用到ZORBAX安捷伦氨基柱，发现每做一次样品，下一次再做的时候，保留时间就稍微提前一点（同一次保留时间基本相同），有关物质A的分离度也越来越差，基本上进个几百针后分离度就达不到要求了，但是理论塔板数没多大变化，我有以下几点疑问：

1.我看了下氨基柱的有关资料，觉得寿命应当不会这么短，我的流动相是KH2PO4缓冲盐：乙腈=28:72，流速 2.0ML/MIN，冲洗是用乙腈：水=30:70，1.0ML/MIN的流速冲洗半小时，再用乙腈：水=70:30,1.0ML/MIN的流速冲洗一小时，再用乙腈保存，是我的冲洗程序不好吗？

2.我的进样量是20MG/ML，是否因为进样量太大，导致样品中的某些成分与色谱柱发生作用，不好洗脱下来

3.我对新柱子的处理方法是异丙醇低流速过夜，然后换乙腈1.0流速冲洗半小时，然后是乙腈：水=72:28，再上流动 相，这样等系统平衡后，走样品时最开始根本走不出我所要的峰形（对照品前面有三个杂质峰，它可能有四个，主峰后有个小肩峰，开始根本没有），并且峰面积也在不断变化，一针比一针大，至少要进七八针才正常，是什么原因导致的？

4.后来看见说安捷伦的氨基柱是用纯乙腈保存的，是否应当直接用乙腈：水=72:28冲洗下，再直接上流动相？
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  • 周伯通pp (2011-11-23 14:45:20)

    我觉得你如果直接用乙腈：水=72:28冲洗柱子就上流动相的话，有可能会造成仪器管路和柱内形成结晶，对柱子和机子都会有损害。试着用10%或20%的乙腈水冲洗柱子30分钟到60分钟左右再上流动相看看。

  • wsll (2011-11-23 14:45:47)

    我是看的色谱柱的说明书说只需要把缓冲盐的比例换成水就行了，用10%或20%的乙腈水冲洗柱子，对氨基柱的损坏不是很大？氨基柱比较容易水解，水的比例越大，越容易水解

  • 周伯通pp (2011-11-23 14:46:23)


    这个品牌的柱子是没用过，但我一直在用依利特的柱子，也是磷酸盐条件，只是每次用之前都会用10%的甲醇水冲洗半个小时，使用了快1年半了，各方便都还挺好的。

  • 木槿 (2011-11-23 14:52:04)

    出现上述情况的可能如下：

    1.进样量：应该在一个合理的范围内，经常超载，下降很快那是正常的事情

    2.还要根据色谱柱的说明书进行使用与维护保养，不可图方便

    3.注意样品以及流动相的PH范围，尽量不要超过说明书推荐的范围

    4.系统平衡需要时间，不可盲目

    5.使用缓冲盐用后要及时冲洗

  • DDD (2011-11-23 14:57:48)

    我们做这个项目，有关物质检查用氨基柱，基本上进三四十针杂质A就分不出来了，不到一个星期柱子就不能用了，这是什么原因呢？刚开始做就坏了两根柱子了，急需指点哈！！！

  • 木槿 (2011-11-23 14:58:42)

    请你先把问题说清楚点，我又看不到你心里

  • lagua123 (2011-11-23 15:00:17)

    氨基柱一般不耐水，乙腈：水=30:70冲柱子似乎不妥，建议直接用乙腈：水=70:30冲。另外，分离度下降的同时，柱压有没有变化？

  • xueyouzhang (2011-11-23 15:00:42)

    从我使用的经验看，氨基柱保存在乙腈中好像是很容易不好：分离度降低，理论板数减少

    为什么这样我也不明白

    不过楼主说的理论板数没有减少，那是不是和我的一样就不好说了

    建议氨基柱还是保存在异丙醇中会比较好，而且最好是每次使用后都用异丙醇冲一下

    另外，也可以试一下再生以后看看情况如何。
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