有效提高病毒感染效率

慢病毒感染增强剂Envirus-LV可有效增强慢病毒的感染效率

一 重要提示
1.采用Envirus-LV增强后，感染时的细胞融合度对感染效果有影响，建议细胞融合度在50%左右时进行感染实验(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。
2.确定了细胞量以后，建议采用倍比稀释的方法，用不同量的慢病毒（MOI值：1－100pfu/cell）进行实验以确定最佳的慢病毒用量。
3. Envirus-LV和病毒的稀释液采用和细胞基础培养基一致的无血清液体，如无血清DMEM或1640。
4. Envirus-LV和感染效率的关系：在其他条件固定的情况下，增强剂用量越大，感染效率越高，一般增强剂的用量可以用到推荐用量的1-3倍。但增强剂用量过大，可能导致细胞毒性。
二 实验过程（以24孔板为例）
1.提前一天细胞铺板
提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。
2.感染
⑴将2ul的Envirus-LV用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成Envirus-LV稀释液。4℃静置5分钟。
注：感染悬浮细胞，建议增大Envirus-LV到推荐用量的1-3倍，这样感染效果更好。
⑵将适量病毒原液或稀释液与Envirus-LV稀释液轻柔混匀，4℃静置15分钟。
注：如采用病毒原液直接混合出现沉淀，建议用与⑴等量同样的无血清稀释液稀释病毒。


⑶将上述混合液加入到含完全培养基的细胞上，37℃培养8小时后观察细胞状态，如没有明显变化，不要更换培养基，继续培养24小时后常规更换培养基。由于慢病毒感染较慢，一般在感染96小时后观察结果。
注：适当减少感染时的细胞培养基量可以增加感染效率，但也可能增加细胞毒性。如出现细胞毒性可增加培养基量或更换培养基。