SepaFlash® Ruby系列高分辨正相硅胶柱重复使用及保存指南

应用技术研究中心

SepaFlash® Ruby系列分离柱是三泰科技最新推出的高分辨正相硅胶柱产品，因其预装了粒径为25 μm的球形硅胶，且该硅胶的比表面积高达700 m2/g，相对于普通的正相硅胶（40 - 63 μm无定形或20 - 45 μm球形，比表面积一般为500 m2/g），SepaFlash® Ruby系列分离柱具有更高的柱效以及更大的上样量。然而，该系列产品相对较高的定价可能会令有意采购该产品的客户心存顾虑。

其实，这种担心是完全不必要的，因为只要保存得当，SepaFlash® Ruby系列分离柱完全可以做到多次重复使用。即便该系列产品单价相对较高，若是考虑到使用多次后平摊下来的成本，对于广大用户来说仍然是十分经济的。再加上该系列产品对样品出色的分离效果，以及其高上样量带来的通量优势，可以说是广大用户进行日常分离纯化工作的最佳选择。今天这篇应用案例就给大家介绍一下SepaFlash® Ruby系列分离柱的重复使用及保存方法。



实验部分



1. 样品信息



本案例中所用样品为标准品混合物，配制过程如下：称取苯甲酸甲酯1.6 g，邻苯二甲酸二甲酯2.0 g，邻苯二甲酸二乙酯2.0 g，将上述标准品溶于适量乙酸乙酯中，充分混匀后与6 g正相硅胶（100-200目）混合拌样，经旋蒸除去有机溶剂后，将准备好的样品均匀的倒入用于固体上样的12 g iLOKTM空柱管（订货号：SD-0000-012）里面，保持样品层表面水平，并加一定量的石英砂覆盖在样品层表面以减少样品表面空隙。



2. 分离柱保存方法



为验证不同溶剂对分离柱保存效果的影响，我们选择了石油醚、乙酸乙酯、乙醇以及异丙醇作为分离柱每次使用后的保持溶剂，分别将分离柱保存在这些溶剂中，然后每隔7天利用分离柱对样品进行一次分离，验证分离柱在这些溶剂中保存一段时间后的分离效果。



3. 样品的Flash分离纯化实验方法


根据表1所示的实验参数设置，利用SepaBeanTM machine T对样品进行自动分离纯化。


表1. 样品的Flash制备实验参数

表1. 样品的Flash制备实验参数.jpg

结果与讨论



实验结果表明，不同溶剂对分离柱保存的效果差异很大。首先来看石油醚，这种溶剂不适合作为保存溶剂，当分离柱保存在石油醚中时，在分离实验开始前的润柱平衡过程中，即可发现分离柱填料出现了塌陷现象，导致后续的分离实验无法顺利进行下去。因此，可以排除石油醚作为保存溶剂的选项。



其次，当采用乙酸乙酯作为保存溶剂时，间隔7天后对样品进行分离纯化，从分离图谱上看柱效基本不变（参见图1）。但是，间隔14天后进行重复进样分离实验，结果表明分离柱的柱效大为下降，峰形变得不规则且后拖尾严重。从分离柱外观上看，由于乙酸乙酯对分离柱材质有化学作用，因而分离柱外形发生了变化。这些结果表明，乙酸乙酯也不适合作为分离柱的保存溶剂。

图1. 分离柱在乙酸乙酯中的保存效果.jpg

图1. 分离柱在乙酸乙酯中的保存效果

接下来看一看乙醇的保存效果，从分离图谱上看（参加图2），分离柱对样品的分离效果从0天直至21天没有明显的下降，证明了乙醇对分离柱起到了很好的保护作用。此外，乙醇作为保存溶剂时，分离柱外观无明显变化，且润柱过程中柱压也可以控制在较低的水平。因此，乙醇是较为理想的分离柱保存溶剂。

图2. 分离柱在乙醇中的保存效果.jpg

图2. 分离柱在乙醇中的保存效果

最后我们来看异丙醇对分离柱保存的效果。根据样品的分离图谱（参见图3），异丙醇作为分离柱的保存溶剂时也可以保证分离柱的柱效基本不变。然而，最大的问题是异丙醇粘度较高，在润柱过程中容易导致柱压过高从而引起系统暂停，这个限制因素决定了异丙醇也不适合作为分离柱的保存溶剂。

图3. 分离柱在异丙醇中的保存效果.jpg

图3. 分离柱在异丙醇中的保存效果

综合以上实验结果，我们建议选择乙醇作为SepaFlash® Ruby系列分离柱的保存溶剂，在至少21天的时间间隔内进行重复进样分离实验，均可维持分离柱的柱效基本保持不变。


三泰科技出品的SepaBeanTM machine T配合SepaFlash® Ruby系列高分辨正相硅胶柱，可以为用户提供快速高效的样品制备纯化解决方案，助力实验室研究人员轻松完成各类样品纯化任务。


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