毛细管电泳法检测癌基因C-myc胃癌中基因点突变

癌基因C-myc激活和突变在胃癌形成过程中起着重要作用。通过毛细管电泳(CE)方法检测50例胃癌患者中C-myc基因突变,建立一种准确、快速诊断早期胃癌的方法。本实验采用PCR扩增胃癌及癌旁正常组织中C-myc基因第二外显子易发突变的部位基因序列,扩增样品分别经96℃变性和EcoRⅤ酶切处理,以PAGE-SSCP,CE-SSCP,CE-RFLP分别对其突变情况进行检测。优化的CE检测条件:筛分介质PEO浓度3.0%,pH 8.2,电压15 kV,温度15℃;荧光检测:λex=488 nm,λem=520 nm。检测结果:C-myc基因总突变率为20.0%(10/50)。测序分析结果显示C-myc基因第二外显子第53密码子存在点突变,碱基A变为碱基T(GAT→GTT),碱基的改变使氨基酸由亮氨酸替代为谷氨酰胺。本研究数据证实C-myc基因突变与胃癌的形成紧密相关,CE检测C-myc突变基因可作为胃癌早期诊断的简便可靠的方法。