[求助]细胞污染一再出现，求高人指点！

最新回复

• 西子 (2012-1-17 17:36:40)

  是不是有污染啊？
  理论上除非你把所有的瓶口什么的都烧红了，才能灭菌……建议把孵箱清理干净，然后操作的时候注意用酒精喷手，并用灭菌了的酒精棉球擦瓶口……

• yhz1973 (2012-1-17 17:37:02)

  我在开孵箱之前是用75%酒精喷手了的，“孵箱清理”方面有什么好的方法吗，因为只有两个孵箱，对其中一个进行高温来菌时会把细胞转到另一个孵箱内，然后再把细胞转回灭菌的孵箱灭菌另一个孵箱，但有些还没有被发现的污染是存在于种着细胞的培养瓶内的，这样污染会一直存在。

• ha111 (2012-1-17 17:37:20)

  
  所有的培养液，胰酶，什么的，尤其是血清，换新的。

• @STAR@ (2012-1-17 17:37:51)

  培养基或血清和以前一样吗？
  再说夏季培养 这种我的也有过 没法 夏天就歇业了

• yhz1973 (2012-1-17 17:38:15)

  我们实验室有50多人，用的都是一老师配的培养基和血清，好像也没有听其他同学说他们的细胞污染了，我曾把培养基，胰酶，PBS放于37度孵箱孵了48小时，并没有看瓶内液体变混。

• 西子 (2012-1-17 17:38:31)

  
  培养瓶里多放点培养基，可以放在室温几个小时都没事的……你要先用酒精把孵箱里面都擦干净、再换双蒸水、再照紫外半小时。玻璃瓶是可以直接照紫外的，塑料瓶就用酒精消毒吧……最后在下班前用艾叶或者别的什么灭菌的东东熏房间！

• sunnyB (2012-1-17 17:38:52)

  
  建议将培养基全部更换，细胞室所有东西先用新洁尔灭千分之一的浓度进行擦拭消毒，然后再用75酒精擦拭。培养箱也是如此，且把培养箱进气入口处打开检查一下是否有霉菌污染，还要将培养箱里的水全部更换，还可以在培养箱托盘里的水加一点双抗。再将细胞室的地板用新洁尔灭托地，最后用甲醛熏蒸。熏时要把培养箱和操作台打开熏。按照上述操作，应该就能解决问题。

• +小生怕怕+ (2012-1-17 17:39:10)

  
  会不会是培养液、PBS之类的液体污染了呢？

• 小糖块 (2012-1-17 17:39:29)

  
  是不是培养基没有过滤啊，现在商品化的培养基虽然表明是出厂前0.1UM过滤，但不能保证啊，楼主还是使用前自己过滤一下吧，费事但是用的放心

• yhz1973 (2012-1-17 17:39:57)

  建议将培养基全部更换，细胞室所有东西先用新洁尔灭千分之一的浓度进行擦拭消毒，然后再用75酒精擦拭。培养箱也是如此，且把培养箱进气入口处打开检查一下是否有霉菌污染，还要将培养箱里的水全部更换，还可以在培养箱托盘里的水加一点双抗。再将细胞室的地板用新洁尔灭托地，最后用甲醛熏蒸。熏时要把培养箱和操作台打开熏。按照上述操作，应该就能解决问题。
  ==============================================================================================================
  搞不懂的是，好像整个孵箱就只有我的细胞发生了污染，如果是孵箱污染的话我们大家的细胞都应该出现问题的。我换了培养基，PBS，酶，实验前超净台照紫外30Min,并用酒精灯擦台面，整个操作过程都是在酒精灯操作的，真的想不到是什么原因了，请大家帮我想想是怎么回事吧？我快被那些不知出处的菌给整疯了！！

• yhz1973 (2012-1-17 17:40:29)

  是不是培养基没有过滤啊，现在商品化的培养基虽然表明是出厂前0.1UM过滤，但不能保证啊，楼主还是使用前自己过滤一下吧，费事但是用的放心
  ===================================================================================================
  我们整个个实验室50多人都用的是一个老师配的培养基，好像没有听其他同学说他们的细胞出现问题。应该不是培养基的问题吧？

• yhz1973 (2012-1-17 17:40:48)

  会不会是培养液、PBS之类的液体污染了呢？
  -----------------------------------------------------
  我都换了的，还是不行。照样污染！

• 麦丽素1986 (2012-1-17 17:41:26)

  
  貌似真菌污染，丢掉重新复苏

• yhz1973 (2012-1-17 17:41:51)

  貌似真菌污染，丢掉重新复苏
  ==================================================
  关键是复苏的没几天又长了，有的甚至复苏的第二天就长出来了

• ffooll (2012-1-17 17:42:17)

  还有要注意的是你的操作
  ==============================================================================================================
  比如你的隔离衣最好是专门有一件干净的做组织培养的时候穿，操作时衣服袖子不要从开口的培养瓶上方掠过，这个很多人会忽略，结果造成污染

• jujuba (2012-1-17 17:42:41)

  请问你的培养液有没有变黄变浑浊？我在显微镜下焦距不同时，也看到这些
  
  =======================================================
  
  小黑点，但是培养液完全一点染菌现象都没有，也不知道是不是染菌

• flower-201 (2012-1-17 17:43:04)

  超净台有可能污染，紫外灯是照不死的。

• yhz1973 (2012-1-17 17:43:27)

  超净台有可能污染，紫外灯是照不死的。
  =======================================================
  但大家都用的是那两个超净台，别人的没有污染，就只有我的有问题

• HP007 (2012-1-17 17:43:54)

  你的培养基颜色有没有变黄或者浑浊？我的是完全就还是原来的颜色，也没浑浊，所以也不知道是不是污染

• yhz1973 (2012-1-17 17:44:16)

  我不知道怎么把图片贴上去，你的培养基颜色有没有变黄或者浑浊？我的是完全就还是原来的颜色，也没浑浊，所以也不知道是不是污染
  =============================================================================================
  我的培养基也没有什么变化，你在回复我的时候回复框下面有“添加图片或附件”，就可以啦！你的跟我出现的是一样的吗？