[求助]关于Annexin V-FITC/PI方法测细胞凋亡的问题

最新回复

• 二丫头466 (2012-1-18 16:03:52)

  
  
  问题是所得的对照组的凋亡并不是真实的数目，这种方法能否测的对照的实际凋亡率呢？
  
  [ 本帖最后由 二丫头466 于 2012-1-18 16:08 编辑 ]

• caihong (2012-1-18 16:08:32)

  老师的意思应该是你分析结果的时候，必须把阴性对照组的结果也考虑进去。
  测出来的对照组的凋亡率才百分之一点几，为什么就不可能呢？
  还有啊，对照组的凋亡率越少，不是就把你药物处理后的结果更加明显了吗？好事！

• caihong (2012-1-18 16:09:20)

  那你要分析为什么流式不能测得真实的数目的原因了：
  凋亡少测了：染料浓度不对？或者细胞数目太多也会导致燃料浓度相对不足。
  关注高手解惑！

• zhezhe (2012-1-18 16:09:38)

  
  我感觉好像流式做凋亡得不出绝对数值，只是个相对数，设对照的目的就是假设其凋亡细胞数为零。在这样的基础上才能将测定组细胞在对照组织所圈定范围之外的细胞认为是凋亡的细胞。

• 二丫头466 (2012-1-18 16:09:56)

  
  不是吧，PI染色测细胞周期好像就可以直接测出绝对值吧

• zhezhe (2012-1-18 16:11:32)

  
  好像需要用已知的正常细胞做对照，因为其各期细胞明显可区分，我们这儿的老师用鳌血做正常细胞的对照。

• 二丫头466 (2012-1-18 16:12:04)

  那鳌血的凋亡确实为0吗？我们这里没有确定的对照，每次都是我们自己找对照组，可肿瘤细胞的凋亡率接近10％呢，如果把它设为0的话，加药组的凋亡率就显得太少了。

• 黄花菜 (2012-1-18 16:13:14)

  楼上几位说的极是！
  对照1点几没问题，就是个背景问题，也就是相对问题。一只蝴蝶在火车上跟车同向飞行，在地面上看，蝴蝶100m/s,火车90m/s,那么，蝴蝶当然就是100－90＝10m/s了（好快！）。如果火车10m/s，那么蝴蝶当然就是90m/s(这是火箭！！)了！
  这就是对照，为了计算出凋亡率，必须有对照。对照最后要被减掉来看凋亡率。您的对照1点几几乎可以忽略不计，这样样品组凋亡率自然相对比较高一些！
  流式测出的是凋亡率，做annexinV测出的是凋亡细胞占正常细胞的比例。测绝对值干嘛？？1000个细胞有100个凋亡是10％，100000000个细胞10000000个细胞凋亡还是10％，本来就是看比例的嘛！
  以德唬人 说的对，1点几主要要看的是：有没有疑问，是不是荧光染料相对不足造成的。如果不是，那么很好嘛，说明细胞养的不错哟，要是正常对照都50％，那还得了！
  另外：PI做周期看的也是比例！

• jrwyyplt (2012-1-18 16:13:43)

  
  版主说得对，我的对照组细胞（未用药处理的肿瘤细胞）凋亡率每次都只有1点几，零点几也有过，这是我最想要的结果！

• one (2012-1-18 16:14:21)

  
  那么染料和细胞的比值大概是多少比较合理，求高手解答