高效液相色谱法测定大蒜油缓释片中大蒜素的含量

　【摘要】 目的 建立大蒜油缓释片中大蒜素的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法,DiamonsilTM(钻石)C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),以甲醇-水-甲酸(80∶20∶0.1)为流动相,检测波长为218 nm,流速1.0 mL/min,柱温25 ℃。结果 大蒜素在0.05～0.25 μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,加样回收率为99.5%(RSD=1.7%)。结论 本法简便、准确、灵敏度高、重复性好,为该制剂的质量控制提供了依据。

　　大蒜油缓释片是将大蒜油以β-环糊精包合再添加辅料而成,具有良好的抗凝血、降血压、解毒、抗氧化、抗老化及调节机体免疫功能的作用[1]。为了有效控制该制剂的质量,我们采用反相高效液相色谱法对大蒜油缓释片中的大蒜素进行了含量测定。现报道如下。

　　1 仪器与试药

　　Agillent 1100型高效液相色谱仪。大蒜油缓释片为自制(批号20060401,20060402,20060403);大蒜素对照品购于青岛江兴生物科技有限公司(批号20060510)。甲醇为色谱纯(美国Tedia公司);水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　DiamonsilTM(钻石)C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm);流动相：甲醇-水-甲酸(80∶20∶0.1);流速：1.0 mL/min;检测波长：218 nm;柱温：25 ℃。色谱图见图1。

　　2.2 对照品溶液的制备

　　取大蒜素对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 mL含大蒜素10 μg的溶液,即得。

　　2.3 供试品溶液的制备

　　取本品10片,研细,混匀,取粉末约30 mg,精密称定,置50 mL量瓶中,加80%甲醇40 mL,超声提取30 min,取出,放冷,加80%甲醇定容至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,以0.45 μm的微孔滤膜滤过,滤液即为供试品溶液。

　　2.4 线性范围及标准曲线的制备

　　精密吸取对照品溶液5、10、15、20、25 μL,分别注入液相色谱仪,按“2.1”项下色谱条件进行测定。将测定数据进行线性回归,以峰面积值为纵坐标,进样量为横坐标,得回归方程为：Y=465.38X+13.35(r=0.999 9),结果表明,大蒜素进样量在0.05～0.25 μg之间有良好的线性关系。

　　2.5 精密度试验

　　分别精密吸取同一浓度的对照品溶液10 μL,连续进样5次,对照品峰面积积分值RSD=1.7%,说明精密度较高,测定可靠。

　　2.6 稳定性试验

　　取供试品溶液分别在0、2、4、6、10 h进样,每次精密进样20 μL,结果表明,供试品溶液在10 h内测定是稳定的,RSD=1.8%。

　　2.7 重复性试验

　　称取同一批号(20060401)大蒜油缓释片粉末5份,每份约30 mg,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,测定含量,试验结果表明,本方法重复性较好,RSD=1.9%。

　　2.8 加样回收率试验

　　分别精密称取本品(批号20060401)5份,每份约15 mg,精密称定,分别加入大蒜素对照品溶液1.5 mL(浓度为0.1 mg/mL),待吸收均匀后,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,测定含量。结果见表1。表1 加样回收率试验结果

　　2.9 样品测定

　　取本品3批,测定大蒜素含量,结果见表2。表2 样品测定结果

　　3 讨论

　　大蒜油药理作用及疗效广泛,可用于多种疾病的防治。但大蒜油属于辛辣之品,有特殊的臭味和刺激性,通过采用β-环糊精包合技术以及缓释技术,将大蒜油制成包合物后,再加入部分辅料制成缓释片剂,可掩盖特异性臭味,减少大蒜油对胃肠道黏膜的不良刺激作用,稳定大蒜中的有效成分,以确保制剂质量稳定以及疗效的稳定性。

　　缓释片剂在纯有机溶剂中溶解度差,因而提取溶媒选择与流动相接近的80%甲醇提取,并减少取样量,增大溶媒量,以保证供试品中的大蒜油被提取完全。通过含量测定考察了提取溶剂的用量,结果80%甲醇用量为40 mL时提取完全;同时考察了超声提取法及水浴回流提取,结果二者含量测定结果相近,因而选用了简便的超声提取法,超声30 min后含量不再变化。

　　流动相的选取参考了文献[2]的方法,将甲醇和水的比例稍作调整,在该条件下,供试品溶液中大蒜素峰分离度良好,阴性对照无干扰。

　　【参考文献】
　　[1] 吕圭源,王一涛.中药新产品开发学[M].北京：人民卫生出版社,1997. 920-921.

　　[2] 蒋 慧,刘 斐.高效液相色谱法测定大蒜素注射液中大蒜素的含量[J].中国药业,2005,14(2)：43.