[求助]RAW264.7培养

最新回复

• yes4 (2012-2-11 11:20:57)

  小鼠单核/巨噬细胞RAW 264.7本身就比较难消化，在ATCC对该细胞传代的描述中是采用细胞刮棒进行的。我们的经验是，以0.25%胰酶+0.02%的EDTA作为消化液。使用温至室温的消化液进行消化，消化时镜下观察，并用手掌轻拍细胞贴壁的瓶底，约3~5 min后，待约10%左右的细胞脱离瓶壁即可终止消化，弃去胰酶，以含10%FBS的DMEM培养基吹打细胞。值得注意的是该细胞对机械损伤比较敏感，所以不要用吸管反复吹打细胞。该细胞很难将瓶内所有细胞都吹下来，所以换瓶传代就行了。看了楼主的描述，感觉是细胞难以耐受机械损伤而导致裂解了。
  
  多多交流！

• lixi559 (2012-2-11 11:21:41)

  
  我的细胞跟楼主的一样，今天痛苦得不行了，是不是先变成很不规则的多边形然后裂解？多交流阿！

• 盼盼 (2012-2-11 11:22:05)

  
  是啊.就是传几代就不行了.我是都有吹打,如果不吹打的话怎么能成单细胞呢?我现在也不知道怎么办啊

• tangxin_80 (2012-2-11 11:22:26)

  
  小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的消化及传代： RAW264.7因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢，普通的方法根本就不可能将它消化下来，这也是养这种细胞最头痛的问题。现将我的一点心得，简介如下： 消化液：0.5％胰酶、0.2％EDTA，实验前加温到37度 以50ml培养瓶为例：1、细胞贴壁生长，长满瓶底80％时，弃去培养液，加D-HANKS 漂洗两次；2. 加入含胰酶和EDTA的消化液1－2ml,消化37℃约2-5min，镜下可见细胞基本圆形回缩即中止消化，弃消化液加D-HANKS 漂洗两次；3.加入新培养液10ml复吹打混悬细胞，按需要分入新的培养瓶RAW264.7
  RAW264.7因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢。 我得操作如下： 实验前将DPBS及DMEM加温到37度 使用Flask75培养瓶： 1、细胞贴壁生长，长满瓶底70％时，弃去培养液，加DPBS10ml漂洗一至两次；弃去 2. 加入10mlDPBS,然后用scratcher轻轻刮即可，离心后去除DPBS.用DMEM培养液10ml复吹打混悬细胞 3.分入新的培养瓶； 4. 入37℃5％CO2孵箱，几小时后即可再贴壁；4. 入37℃5％CO2孵箱，几小时后即可再贴壁。

• bamboo16 (2012-2-11 11:22:46)

  
  我也在养RAW264.7，没有感觉难以消化
  我是用0.25%的胰酶进行消化，然后用吸管甚至枪头吹打，生长状态蛮好。刚买回来时几乎全漂浮，以为要死光，一直放在培养箱里没有管，后来它自己长着长着倒是长好了

• eric930 (2012-2-11 11:23:07)

  
  我最近刚开始养这种细胞，前天是第一次传代，我用的是0.25的胰梅，不加EDTA,较难消化，我消化了三次。我的QQ:希望多多交流，呵呵

• abc816 (2012-2-11 11:23:26)

  
  我最近一个月都在养巨噬细胞，是很难消化的，但让我头痛的不是消化问题而是冻存与复苏问题，冻存的时候用7：2：1冻的，复苏出来第二天观察几乎全漂在上面了，换了液后发现细胞所剩无几，很郁闷，不知道是我冻存的问题还是什么？

• 生物迷 (2012-2-11 11:23:48)

  我养了一年的RAW264.7，从来没有用过胰酶消化传代。
  
  我一直是直接用弯嘴滴管吹打的。也不费力，只要按照顺序一片片地吹打，很容易就能够把该细胞吹打下来。吹打一遍之后，置镜下观察哪里还有未吹下的细胞，再着重吹打。
  
  对于RAW264.7细胞，他的生长时喜欢结伴的。正常的生长状态应该是一小片一小片地生长。片片之间不连接，等到长的更多更密的时候就会连成大片，并且会叠加成层。所以，要很好地控制好细胞的生长速度，不要等到叠加成层的时候再传代。
  
  RAW264.7细胞传代后贴壁时间比较短，半小时就能贴很多，刚贴壁时细胞呈圆形，折光度很好，镜下观察明亮如小珍珠状一个个地散落于瓶底面。生长一段时间后，部分细胞会变为类似四角形，伸出伪足之类的吧。这个时候其实就是提示你注意传代了，这部分细胞如再不传代，很容易就老化掉。
  
  对于该细胞还有很多经验体会，各位可去看看我以前发的帖子。“如何把细胞养的更漂亮！”
  
  有问题，大家可以留言或者短我。

• 生物迷 (2012-2-11 11:24:09)

  我的细胞跟楼主的一样，今天痛苦得不行了，是不是先变成很不规则的多边形然后裂解？多交流阿！
  
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  巨噬细胞本身就会呈不规则状的多边形，当在培养瓶里多数细胞呈现出此种形状之时，就是提示你该传代了。如果不传代，细胞就会老化，脱落，死亡。可以去关注下我发的帖子。

• huifeng0516 (2012-2-11 11:24:31)

  我也在养这个巨噬细胞 我的上面有好多小颗粒 不知道是什么
  有在长沙的群友吗 能不能教教我

  
  29421033.jpg

• 生物迷 (2012-2-11 11:25:38)

  我也在养这个巨噬细胞 我的上面有好多小颗粒 不知道是什么
  有在长沙的群友吗 能不能教教我
  
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  你的细胞从图片上看不是正常的巨噬细胞生长状态了，细胞颗粒是该细胞老化产生的一些分泌物以及细胞的裂解等。
  
  但是里面还有生长状态还可以的。你可以进行“二传”。

• duoduo (2012-2-11 11:26:02)

  
  我在米国也正在养这种细胞
  刚开始也是用胰酶，实验进行顺利
  后来，改用刮片直接刮细胞
  结果也很好
  这种细胞很好养的，从来未出现过什么问题