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[分享帖]新手养细胞的心得
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我养细胞1个月了，经历了失望-绝望-希望的过程，现在把学到的几点注意问题跟大家分享一下，希望能够对新手们稍有帮助,也欢迎高手指教：
1.细胞不要过度消化，有些贴壁不牢的如293T，加入胰酶在台子里晃晃就可以了，不用放到温箱中；
2. 传代时，细胞分的稀了或者分的不均匀，形成单细胞的克隆群，细胞就会长成密密麻麻的一群，如293T会成为小方块状，而不是正常的不规则形状，这时候，即使没有长满盘，也应该消化重新铺板。
3. 贴壁细胞的上清看起来清亮、颜色正常时，即使在镜下检测有些悬浮物，一般不是污染而是死细胞，尤其是复苏的细胞，由于有死细胞，会有很多悬浮物。（我以前看到有悬浮物就以为污染了，还倒掉了好不容易借来复苏的一盘细胞，后悔ing）。污染了会看到明显的悬浊液。
4.不能让培养基变色，稍微变黄就应该传代，如果没有长满，可以换液，但是如果变黄了，细胞就会皱缩，或者死亡，大批量的浮起来。这时候就别挽救了。
5. 关于污染，刚开始做的时候，无论怎么小心，还是会莫名其妙的污染。师姐说是人生必经阶段。现在我也很赞同这个理论。所以，绝望后别放弃才会有希望！
祝新手同志们都能顺利的迈出养细胞的第一步！
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最新回复
兔唇 (2012-2-13 11:17:40)
我也是做细胞培养的，我建议隔一天换一次液，最多可以两天换一次，如果时间再长会出现细胞死亡老化现象。
is2011 (2012-2-13 11:18:16)
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这个要根据不同的细胞，有的细胞长的慢，不易贴壁，适合三四天换一次液，换液太勤对细胞有刺激~ 注意细胞密度，和传代的时机，这和细胞的死亡、老化关系更大。
911 (2012-2-13 11:18:52)
dog002 (2012-2-13 11:19:11)
我也是刚开始养细胞，这心里一天忽上忽下的，刚开始养的时候看什么现象都觉得是污染，可是用培养基培养了确什么也没长，原来是死细胞，现在想开始试验了，可是发现细胞长的慢，前天埋的96孔板今天看了下基本上没长，还有好多死的，愁死我了，不知道是配置了一个月的培养液没有营养了还是真的是什么支原体污染了！希望我快点走过绝望期！
pencil菲 (2012-2-13 11:19:39)
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配制了一个月的培养液？？我们这边的完全培养液配制了之后要在一周内用完，过一周之后随着时间延长，小牛血清的含量会减少的，这样当然会影响细胞生长啊！
建议你赶紧换新的培养液或者是往原来配的培养液里再加血清吧！祝你实验顺利！！
milkdog (2012-2-13 11:20:36)
我也是刚刚开始养细胞，污染的问题只要稍加注意，应该能够克服，比如，超净台以外的东西千万别接触细胞，用枪吹打细胞时，一定盯紧枪头，防止倒吸的液体与培养基接触，培养皿的内壁要格外注意。
现在最棘手的是消化程度的把握，希望有高手指点！
dog002 (2012-2-13 11:20:58)
不过细胞状态可能没那么好了，慢慢样吧。
yychen (2012-2-13 11:21:22)
如果培养基是直接买的，而不是配置的，也是一周后要再补加血清吗？加的量怎么确定？
黄花菜 (2012-2-13 11:21:46)
我也是新手，我听说培养基一般要求在配好后两周内用完。几天前种的96孔板，第二天看细胞很好，大都分都贴壁了，可是第三天换完液后第四天看细胞就不成型了，后来细胞状态每况愈下。我请师姐看了说是没有污染，应该是换液操作过程中对细胞损伤太大了。真是很揪心，期待各位给点指导。
idea2011 (2012-2-13 11:22:10)
每次都是消化过，现在好了，了解细胞脾气最好，也能很快适应
qumm1985 (2012-2-13 11:22:36)
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传代至96孔板细胞不长很可能与你消化和吹打有关，我的培养基用几个月都没问题呢，配了一个月的培养基可以用的。
dog002 (2012-2-13 11:25:15)
我养L929细胞，应该是梭形和倒三角形的，可是最近细胞虽然贴壁情况很好，但是细胞形态略有变化，现在圆形的占大多数，不知道为什么？是细胞老化了吗?
lixi559 (2012-2-13 11:25:40)
我之前做原代细胞液一样，觉得很注意了还是污染，后来熟练了就好了，所以刚开始做污染一定不要灰心哦，，，有志者事竟成
vvmmoy (2012-2-13 11:26:06)
remenb (2012-2-13 12:01:09)
00无名指00 (2012-2-13 12:01:40)
我刚开始养细胞，现在出现了霉菌污染，我觉得还可能是细菌，真的很头痛，希望各位高人能帮我找出一些可能的原因
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