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酶水解法可以用淀粉来测定
【关键词】标准物质网站 对照品 中检所标准品 北京标准物质中心酶水解法可以用淀粉来测定
内容摘要：样品经除去脂肪和可溶性糖类后，在淀粉酶的作用下，使淀粉水解为麦芽糖和低分子糊精，再用盐酸进一步水解为葡萄糖，然后按还原糖测定法测定其还原糖含量，并折算成淀粉含量。 因为淀粉酶有严格的选择性、它只水解淀粉而不会水解其他多糖，水解后通过过滤可除去其他多糖。所以该法不受半纤维素、多缩戊糖、果胶质等多糖的干扰，适合于多糖含量高的样品，分析结果准确可靠，但操作复杂费时。
1．原理
样品经除去脂肪和可溶性糖类后，在淀粉酶的作用下，使淀粉水解为麦芽糖和低分子糊精，再用盐酸进一步水解为葡萄糖，然后按还原糖测定法测定其还原糖含量，并折算成淀粉含量。
因为淀粉酶有严格的选择性、它只水解淀粉而不会水解其他多糖，水解后通过过滤可除去其他多糖。所以该法不受半纤维素、多缩戊糖、果胶质等多糖的干扰，适合于多糖含量高的样品，分析结果准确可靠，但操作复杂费时。
2．仪器
①水浴锅。
②回流冷凝管。
3．试剂
①85％乙醇。
②yi醚。
③碘溶液：称取3．6 g碘化钾溶于20 mI。水中，加入1．3 g碘，溶解后加水稀释到100mL。其余同蔗糖的测定。
④0．5％淀粉酶溶液：称取0．5 g淀粉酶，加100 mL水溶解，加入数滴甲苯或三氯甲烷(防止长霉)，贮存于冰箱冷藏室中(最好现配现用)。
4．测定步骤
①样品处理：称取2～5 g样品(含淀粉O．5 g左右)，置于铺有折叠滤纸的漏斗内，先用50mLyi醚分5次洗涤以除去脂肪(如样品脂肪含量少，此步骤可免)。再用约100 mI。85％的乙醇分次洗去可溶性糖类。将残渣移至250 mL烧杯中，用50 mI。水洗涤滤纸和漏斗，洗液并烧杯内。
②酶水解：将烧杯置沸水浴上加热15 min，使淀粉糊化，放冷至60℃以下，加入20 mI．，淀粉酶溶液，在55～60℃保温1 h，并不时搅拌。然后取1滴此液于白色点滴板上，加1滴碘液应不呈蓝色，若呈蓝色，再加热糊化，冷却至60℃以下，再加20 mL淀粉酶溶液，继续保温，直至酶解液加碘液后不呈蓝色为止，加热至沸使酶失活，冷却后移入250 mL容量瓶中，加水定容。混匀后过滤，弃去初滤液，收集滤液备用。
③测定：按还原糖测定法的高锰酸钾法或直接滴定法进行。同时取50 mI．水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液，按同一方法做试剂空白试验。
④酸水解：取50 mL上述滤液于250 mL锥形瓶中，加5 mI。6 tool·L一’盐酸，装上回流装置，在沸水浴中回流1 h，冷却后加2滴甲基红指示剂，用5 mol·L④1氢氧化钠溶液中和至红色刚好消失。把溶液移入l。0 mL容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并人l。0 mL容量瓶中，加水定容，摇匀，供测定用。
5．计算
同酸水解法。
6．说明
①使用淀粉酶前，应确定其活力及水解时加入量。可用已知浓度的淀粉溶液少许，加入一定量淀粉酶溶液，置55～60℃水浴中保温1 h，用碘液检验淀粉是否水解完全。以确定酶的活力及水解时的用量。
②淀粉粒具有晶格结构，淀粉酶难以作用。加热糊化破坏了淀粉的晶格结构，使其易于被淀粉酶作用。
本文引用自 国家标准物质 www.rmhot.com
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