[求助]MTT实验中DMSO浓度的设定

最新回复

• Ao7 (2012-3-08 15:23:35)

  
  wsdwsdwsd提的问题实在是让人心寒!!我去年做了两个月的MTT筛药,脂溶性的药物也不少啊.竟然没有想过这个问题呢.
  不过现在想想可能影响应该不大吧.DMSO终浓度小于0.1%对一般的细胞增殖几乎无影响了,所以稀释法稀释后(一般而言,.DMSO终浓度是远远小于0.1%的),虽然DMSO的浓度不同,但是反正即使最高的
  DMSO终浓度也没影响到细胞的增殖,所以可以不用考虑.
  难道你的药物需要较高的DMSO浓度?那倒是要考虑一下的:可以单纯以DMSO作为研究对象,看看不同的浓度梯度对最后的结果有无影响.如无就方便了!如有,恐怕你的药物要换溶剂了.
  向wsdwsdwsd战友的科学精神致敬.

• summerxx (2012-3-08 15:24:05)

  
  另外，可以补偿DMSO，使得浓度一致

• yysr238 (2012-3-08 15:24:42)

  可是在实际操作中有困难，我一般加入细胞悬液190μl于96孔板每孔中，24h后再加10μl药物，药物与DMSO的终浓度被稀释20倍。我不知道如何补加DMSO，请问主任有和好的方法

• summerxx (2012-3-08 15:25:08)

  可是在实际操作中有困难，我一般加入细胞悬液190μl于96孔板每孔中，24h后再加10μl药物，药物与DMSO的终浓度被稀释20倍。我不知道如何补加DMSO，请问主任有和好的方法
  
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  同时稀释DMSO，补体积

• Ao7 (2012-3-08 15:26:17)

  我感觉如果要补加DMSO的话，加入的DMSO应该不能象药物的梯度稀释那样，要不然还是达不到不同剂量组的DMSO含量一样。
  不知道你的药物浓度梯度是怎样设定的？如果是相差10这样倍比稀释下去的话，我觉得可以认为DMSO浓度最高的那组DMSO含量为x，其他所有组的DMSO含量为0，（那点零头就忽略不计了），这样其他组只要补上含量为x的DMSO总量就好了。
  如果药物的浓度梯度比较狭窄的话，就比较麻烦了，可能还得认认真真一组一组地补加DMSO。唉！！！总之，补加DMSO实在是比较麻烦。很难搞得又快又好啊
  不过我还是在想：实际操作上，应该不需要补加DMSO的吧，那点DMSO真的可以忽略的！！MTT法有这么敏感吗？你怕专家在答辩的时候挑刺？唉！难啊。

• summerxx (2012-3-08 15:26:45)

  
  差多少补多少啊
  
  比如，药物组DMSO含量分别为A、B（A>B），那在B组中补足A-B就可以了；
  若，DMSO为倍比稀释的话（一般指这种情况哦），应该不是很难的。

• langlang (2012-3-08 15:28:29)

  
  我觉得没必要这么精确的，我试过几种细胞，测定它们对ＤＭＳＯ的耐受程度,一般来说,0.2%DMSO对细胞影响不大.如果做对照的话,一般用你所用的最大的DMSO浓度就行.但如果你用的DMSO的浓度太大的话,就没必要了,得出来的结果就不太可信了,也许可能是DMSO和你的药物协同作用.

• bamboo16 (2012-3-08 15:28:49)

  科学要严谨，问题很好解决：
  1.将药物的DMSO溶液稀释到给药浓度的最高浓度。
  2.用含相同浓度DMSO的培养液稀释。

• windy+++ (2012-3-08 15:30:02)

  其实，有时较难准确记录DMSO浓度，因为有时无法忽略溶质所占容积，需要用溶剂定容到所需容积，只能是小于0.1%、0.2%。只有溶质容积能够忽略时，才能准确记录溶剂的含量。最高浓度已经小于，而不是等于？%，很难设定溶剂对照。所以，我觉得真正的溶剂应该是培养液。

• idea2011 (2012-3-08 15:30:25)

  麻烦说具体点好吗?
  我最近在做MTT实验,干预的药物是用DMSO溶的,药物浓度梯度是2,稀释的时候是用的培基,DMSO的浓度也随着等比稀释了.DMSO的终浓度在最高药物浓度组达到了1.25%,应该对细胞有影响吧?
  于是我做了一个单纯的用DMSO作为干预的药物,浓度也依据前面实验的浓度来配的,DMSO也设了6个浓度,可得出来的结果很吓人,6个浓度的DMSO的影响相差不大,48H对细胞的抑制率均在30%以上.
  这下我可没辙了,既然DMSO的作用如此之大,我要测试干预的药物影响,这可怎么办啊,如何来消除DMSO的影响呢?
  请明示,越详细越好,拜托了!

• 2541 (2012-3-08 15:31:52)

  1. 根据你的单纯用DMSO作为干预药物的试验结果来看，你的细胞对DMSO是敏感的（6个浓度的DMSO的影响相差不大,48H对细胞的抑制率均在30%以上），因此可以考虑换用无水乙醇来溶解药物。
  2.在用无水乙醇来溶解药物之前，请先进行预试验，确定在哪个浓度范围之内乙醇对细胞影响不大（DMSO最好也一起重新做一下）。
  3.选择DMSO或无水乙醇重新溶解药物进行给药试验，并设对照。
  说明：保持助溶剂浓度不变的简单药物稀释法：
  a.将药物稀释到给药的最高浓度，假设此时药物浓度是X，DMSO浓度是Y（Y浓度时应对细胞影响不大）。
  b.配含Y浓度DMSO的培养液。
  c.用含Y浓度DMSO的培养液对含药的最高浓度培养液进行等比稀释。（因为两者DMSO的浓度一样，所以怎么稀释都不会变得）

• plaa (2012-3-08 15:32:14)

  
  我用的也是DMSO作溶剂，其终浓度为3%，结果出现了一个惊人的怪现象，染毒24小时镜下观察，随着染毒剂量的增加，细胞死亡越多即活细胞越少，这是正常现象，可是测出的OD值却让人费解，四个剂量组，最低剂量组OD值与对照无统计学差异，可中剂量却明显高于低剂量组和对照组，而高剂量和最高剂量组是正常的均低于低剂量组和对照组，而且是递减性降低的，重复做了几次，结果一样，搞不明白的是中剂量组为何出现这种异常情况，请高手指点（注：我们设了空白对照，和阴性对照，四个剂量组依次为3、10 、30、60）为何10剂量组出现这种反常现象，急盼高高手指点。

• yhz1973 (2012-3-08 15:32:37)

  您提的这些意见正是我很想尝试的,可惜,可惜,因为是新手,将很贵的药物(5MG)一次就用DMSO溶了,都已经是这样了,也没有换溶剂 的后路了,现在只想着能否用统计的方法来消除DMSO的影响.今天再次尝试将药物和DMSO两种药物进行了同期干预实验,结果还是很惊人:最高DMSO浓度组的抑制率比最高药物浓度组的抑制率还高,怎么办啊?好郁闷!

• junhun (2012-3-08 15:33:21)

  可不可以换别的细胞作这个试验，要不也没办法了，只有重买药物，i'm sorry too