[求助]293细胞培养

最新回复

• qhyu (2012-3-08 16:28:08)

  你是哪里的？我是武汉的
  如果确定没有污染的话，你传代时吹打的不彻底或吹打的太剧烈都有可能这样 啊！
  我以前也养过293，可后来冻存时没搞好，结果全死了，不知你是哪里的，可以给我一点细胞吗？

• baidukk (2012-3-08 16:30:20)

  
  第一，要看你复苏的细胞状态好不好，如果冻的细胞本来就不行......
  第二，293贴壁有点困难，复苏后前几代最好用塑料瓶养。
  第三，传代后一到两天不要动，尽量让它贴牢点。
  第四，换液时要gently。
  第五，消化时最好加EDTA，时间不要过长。

• ending (2012-3-08 16:32:48)

  
  293细胞培养时是需要带丙酮酸钠的DMEM，一般用高糖的。
  但是应该不会说的这么快，传2-3代就不行了，估计是细胞本身不行了，建议更换细胞株。
  这个细胞挺好养的，当时我一传一个学期，连续4个月都不会有问题。我用的0.025%的胰酶，加上0.02%的EDTA，我想应该不是这个问题。

• toy (2012-3-08 16:33:13)

  
  293很好养啊！我是直接吹的， 不消化。

• lagua123 (2012-3-08 16:36:12)

  非常感谢大家，我在上海，我是打算用来扩腺病毒的，但是293一直养不好，所以很急，这回孵出来的293状态还好，但是第二次传代后就不行了，有很多碎片，昨天又传了一次，我已经把胰酶的量减的很少了，加了0.05%胰酶和0.05％的DMEM，并且换了所有的液体，今天看还是有一些贴壁了，又换了液明天看怎么样。

• ero11 (2012-3-08 16:37:18)

  我在大连，293细胞长得很快，消化30秒就ok，时间长了可能就漂了，不知道各位都用它做过什麽实验，有做过8-ohdg的吗，它可不好爬片，最后做完小片上留下的细胞很少，不知各位有何高见，让293细胞如何能很牢固的爬片

• october7 (2012-3-08 16:37:43)

  
  今天细胞看起来状态好多了，但是都变成了梭形，不太敢用，所以又孵出一支，希望这一次会好一些
  想问大家一下，塑料瓶会比玻璃瓶好一些么？我怎么感觉玻璃瓶会好些，不太敢用塑料瓶。

• pencil菲 (2012-3-08 16:39:00)

  
  塑料瓶能长的好一点吧！

• 8964357 (2012-3-08 16:42:16)

  总结了一下问题所在，发现胰酶不太好，换了GIBIC的胰酶，0.05％，细胞状态好多了，但是最近有一些细胞变得和以前不一样了，细胞平铺的不是很好，会伸出细长的突起，不知道这样的细胞是否是已经变了，能否继续用于腺病毒扩增，请各位指导，谢谢

• ROSE李 (2012-3-08 16:43:45)

  
  293容易变，应该如何判断呢？谢谢！

• fei1226com (2012-3-08 16:44:13)

  请问腺病毒没有纯化的液体可以存于液氮中么？我查了一下病毒是可以这么储存的，不知道重组的腺病毒是否可以。
  
  『液态氮超低温冻结法 用甘油或二甲亚(DMSO)作保护剂制备细胞悬液﹐分装入无菌安瓿瓶﹐每管0.2毫升﹐在控制温度下降速率为1℃/分钟的条件下预冻至-40℃﹐然後立即放入液氮生物贮存罐中气相(-150℃)保存。恢复培养时﹐先直接侵入38℃水浴中解冻 5～10分钟﹐再种植於适宜培养基内培养。这是根据在低於-130℃时一切生化反应处於停止状态﹑微生物也不能进行代谢活动而设计的冻结法。为避免冻死﹑冻伤和细胞内形成大量冰晶﹐用保护剂制备悬液并控制预冻时的冷却速率和解冻时融化速率。微生物的大多数属种适於慢速冻结和快速解冻。此法适用於病毒﹑枝原体﹑各种细菌﹑放线菌﹑酵母菌﹑丝状真菌﹑蓝藻等。』
  
  我的腺病毒扩出来了，可是纯化的试剂盒还没到，－70度冰箱也不能用，不知是否能在液氮中放三周？
  谢谢

• skytree (2012-3-08 16:44:35)

  
  293细胞 是很容易存活的 没有必要用EDTA 对胰酶的要求也没有这么高
  不过养的时候最好用一次性的塑料培养皿或者培养瓶 我个人经验培养皿比较好用 有利于传代时吹打均匀 这一点很重要 如果吹到不均匀 长的肯定不好 会长成堆 形态也会变 不用担心吹打过度 我都是用1ml的枪吹100次以上 看到细胞全部变成单个的才停 状态很好

• skytree (2012-3-08 16:44:56)

  
  另外 存放三周的话-20就OK了 4度 也没问题 如果你 三周以后马上要用的话
  我的是重组腺相关病毒 比腺病毒还要脆弱一点 请公司做的 公司资料 -70 可以存放一年 -20 半年 4度 三个月 是没有问题的 我曾在4度存放5个月 还能用

• ALALA (2012-3-08 16:45:45)

  
  我这边也出现和楼住相似的问题,传代后不贴,贴了也形态不对,还有就是很多的碎片,感觉也没怎么用力的吹啊!最后在培养皿上有许多的黑点贴着,应该不是污染.
  以我的经验来看，一般是2个问题:
  1.是原来的293状态就不好
  2.胰酶不好
  我现在换了GIBCO的胰酶,到时候发现了是什么问题再交流吧.

• dotaaa (2012-3-08 16:46:47)

  
  不用胰酶消化，多吹几次就行。或者只用胰酶过一下。

• HP007 (2012-3-08 16:47:27)

  
  293细胞很好养啊，生长也快，就是贴壁不是很牢！
  如果不是很珍贵，非要抢救这一瓶的话，我建议再复苏一瓶，如果当初保种没有问题，很快就能养起来的！

• flower-201 (2012-3-08 16:47:53)

  293细胞是半贴壁细胞，所以消化很容易掉下，甚至不用消化都可以成片掉下来！以我经验也的确传代次数多了会发生形态变化，祝您成功！

• 49888 (2012-3-08 16:48:33)

  
  293相当好养的，而且生长很快速，2天就可以传代了
  293贴臂不牢固的，所以拿培养瓶的时候不要摇晃，传代的时候可以不用胰酶，加入新鲜培养基然后用力吹打数次，细胞自然会脱落的。

• 04906 (2012-3-08 16:49:06)

  请教一下，293和293T是同样的细胞么？或者它们有什么不同？

• 04906 (2012-3-08 16:49:49)

  293是293T细胞转染过腺病毒的变体，293中有腺病毒的扩增基因，所以只有293可以扩增腺病毒，293T则不行。
  293和293T都可以用于一般的转染，像是做逆转录病毒的话就可以用293T。