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[求助]急求MCF-7, HEPG2, HEP3B培养技术指导

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2012-3-12 17:12    作者: jujuba    来源: 分析测试百科网

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[求助]急求MCF-7, HEPG2, HEP3B培养技术指导



MCF-7在消化后不容易贴壁，而且生长不是很快，我用的是minimum essential
medium,不知是不是必须用modified eagles medium?

Hep3B 细胞膜 不是很清楚 ，长到什么程度消化比较好 ？ 几天传一次代 ？

HEPG2 只要出现细胞团就消化么？如果已经出现结晶块 ，应该怎么处理结晶 ？
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  • BUK (2012-3-12 17:12:30)

    培养MCF-7我用的是PRMI 1640，加1/250的胰岛素，细胞生长很好。

  • jujuba (2012-3-12 17:14:55)


    我们的细胞是上海的研究所的
    他们那边给的配方 ！
    谢谢
    不知还有什么经验？

  • 969 (2012-3-12 17:15:11)


    MCF-7消化的时间一定要短，我用0.25％胰酶消化半分钟。培养基用的是普通高糖DMEM.

  • caihong (2012-3-12 17:17:53)


    Hep3B的细胞比较娇气，消化的时候要很当心，千万不能消化过头
    HepG2就无所谓了。
    同是肝癌细胞，HepG2相对来说长得比较快，我一般铺96孔板，同一样多的细胞数，HepG2到24小时就长满了，而Hep3B还比较稀拉。

    不过，我们这里的Hep3B的细胞膜很清楚啊。

    我去年花了1200从上海细胞研究所买了三株细胞——老化，污染的细胞！！！！！气死我了！！！

  • jujuba (2012-3-12 17:18:14)


    HEPG2, HEP3B 你们用的什么培养基？？
    血清用的什么品牌？用量是多少 ？
    有没有哈市的同学
    可以当面请教？

  • jujuba (2012-3-12 17:18:31)


    各位
    我发现 咱们群友 养HEP G2的人很多，
    是不是我的问题比较幼稚 ？

  • HP007 (2012-3-12 17:18:52)


    DMRM/F12 效果好，分细胞原则上应在细胞的对数生长期，HepG2 和3B一般要在90-95%Confluence 时最好。

  • redbutterfly (2012-3-12 17:20:07)


    我也在养Hep G2细胞, 有许多成团细胞. 但密度不太大(未长满). 培养时是多长时间换一次培养基呀. 楼上有人说Hep G2长得很快, 但我养却慢, 为何. ?

  • jujuba (2012-3-12 17:20:24)


    他们都说好养 长的快 细胞皮实
    有人用的 1640 培养液
    但感觉应该没什么区别

  • fqswdzd (2012-3-12 17:20:51)


    MCF7用1640培养液,HepG2用DMEM-low培养液。两种细胞的生长都较快。

    --------------------------------------------------------------------------------------------

    我也在养Hep G2细胞, 有许多成团细胞. 但密度不太大(未长满). 培养时是多长时间换一次培养基呀.
    ----------------------------------------------------------------------------------------------
    HepG2成团生长是它的特性，没有办法改变，只要传代时细胞分布均匀即可。先计数细胞按2.5×10E5/ml 或直接按原细胞液的1：5/1：10比例稀释传代，每三天换液一次。

    本实验室专做HepG2的研究，欢迎探讨。当然还有很多种的细胞也在用，不做赘述。

  • vera+ (2012-3-12 17:22:36)


    上ATCC的网站查一下相关细胞株的详细培养信息，上面的信息非常的详细！！

  • vera+ (2012-3-12 17:22:59)

    下面这个是ATCC的培养formula，如果是国内购买的细胞株一般应该有相应的培养方案供你参考的。
    complete growth medium: The base medium for this cell line is ATCC-formulated Eagle's Minimum Essential Medium, Catalog No. 30-2003. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: 0.01 mg/ml bovine insulin; fetal bovine serum to a final concentration of 10% .
    Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
    Temperature: 37.0°C

  • sunnyB (2012-3-12 17:23:32)


    这三种细胞都很好样， 用啥培养基都活

  • tieshazhang (2012-3-12 17:32:10)

    我现在也在养Hep G2，每次消化后都有很多很大的团块，对实验影响很大！你们实验室做这个细胞比较多，有没有什么的方法将Hep G2消化成单细胞悬液，同时对细胞活力影响不至于很大，多谢啦！

  • 49888 (2012-3-12 17:32:33)


    Hep G2消化吹打后静置，成团的更容易沉降，就吸取上层消化液，相对而言，成团的细胞较少。

    另外，有没有做Hep G2的稳定细胞系啊？转染前细胞状态很好，但是一进行药物筛选，前几天细胞还行，突然某一天细胞就死得差不多了，得到的antibiotics-resistant clones非常少。我们摸索过药物浓度，觉得基本掌握其杀伤浓度了。

    大家采用的哪种antibiotics以及浓度，还有没有其他注意事项啊？

    谢谢大家！
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