[求助]细胞传代后就有问题了,发现有很多黑点,怎么办?

字体: 小中大 | 打印发表于: 2012-3-13 15:25 作者: 49888 来源: 分析测试百科网

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[求助]细胞传代后就有问题了,发现有很多黑点,怎么办?

各位师兄师姐,我前两天复苏了一管别人冻存的小鼠成纤维细胞,长得还可以,四天后传代了1托3,今天是传代后的第二天发现三瓶中有一瓶的培养液很快就变成橘黄色,另外两瓶还可以. 于是我就把那瓶变色的换液了,可是换完液就觉得又变黄色了, 镜下观察细胞很不规则,胞核有的就看不到,而且胞质和胞核里面有很多黑色小点. 我这已经是第二次培养了.第一次失败了.现在很是着急,实验不能继续啊, 请有经验的师兄师姐各位老师帮忙分析一下,

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最新回复

49888 (2012-3-13 15:25:40)

再来一张看不到胞核

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49888 (2012-3-13 15:26:01)

传代前的一张

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131415 (2012-3-13 15:26:27)

我也出现过你类似的情况，后来感觉还是传代时消化过头，以至于细胞老化（胞浆出现明显黑色颗粒是细胞老化的标志），现在我采取的消化传代方法是：
1，先用PBS细两遍，以去除残余血清对胰酶消化的影响
2，加适量胰酶（以能铺满瓶底为宜），镜下观察见饱体回缩时即倒去胰酶
3，利用剩下的一点点胰酶再消化，此时可以放入37度温箱中
4，隔半分钟到一分钟将细胞拿出，侧拍瓶壁（用力），镜下可见细胞基本都已掉下来，此时可以加含血清培养基中和，再用吸管吹瓶壁，这样能再吹下来一些细胞
greenbee (2012-3-13 15:29:50)

应该是的，消化不能等到细胞都悬浮，那样已经是消化过头了，还有你一比三传代是不是也有问题，细胞传代密度不够也会造成生长不好，出现老化现象（有小黑点）
8964357 (2012-3-13 15:30:17)

我的情况和你一样,我养的是肺癌A549细胞,刚复苏之后就有.传代之后也有,但似乎对细胞影响不大,很是郁闷呢!
ha111 (2012-3-13 15:30:41)

同意楼上的观点，细胞传代密度不够会造成细胞生长不好，可以试着将细胞再次传代。
49888 (2012-3-13 15:31:00)

楼上的几位同行都深有感触。其实我第一次失败的时候看到的也是这种情况。师姐说有污染了所以就丢掉了。我传代的时候细胞已经生长到90％了，对了那么传代的时候比率多少合适？请大家给个建议？下面是我昨天刚拍的照片

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pengke1983 (2012-3-13 15:31:33)

楼上说的都不错。但是LZ的问题跟你们说的不搭边。LZ的操作没有问题，细胞密度没有那么重要，成纤维细胞1传10也不会出现这种问题。
这个细胞的生长状态极差，很可能是污染所至，而且这个污染应该在很久以前就有了，就是说你复苏的细胞在冻存前就污染了。重找一支新细胞，或者养原代。
49888 (2012-3-13 15:32:12)

我考虑可能有以下的原因：1。如果细胞污染但是第一代很好啊 2。传代时消化的过了3 。细胞老化了。
mickeylin (2012-3-13 15:33:01)

我的细胞也出现了此类问题，但是我感觉我没有消化过度呀，我以为是污染了，但是培养液的颜色正常，而且不浑浊，细胞生长也很快，没有老化的趋势，这是怎么回事，郁闷中！
49888 (2012-3-13 15:43:06)

下面是我用丝裂霉素c处理后的细胞样子更难看了！
很是郁闷啊！我还想用它来养干细胞呢，我改怎么办呢？超级郁闷！
第一代时还好好的，一传代就是这个熊样了，55

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wu11998866 (2012-3-13 15:43:42)

把这个丢了，重新再复苏一管吧
plaa (2012-3-13 15:44:42)

天啊我的鼠胚胎成纤维细胞状态和你的一样啊制备成饲养层后也是我也是怀疑污染了不晓得楼主后来用什么方式解决了呢？