[求助]求教细胞计数经验

最新回复

• TAT (2012-3-20 15:20:00)

  
  我们用黄枪头加的，没发现有气泡

• kuaizige (2012-3-20 15:20:31)

  
  先加完再盖上玻片

• 831226 (2012-3-20 15:20:50)

  
  多加点量罢，用液体把气泡赶出去

• hot_hot_hot (2012-3-20 15:21:34)

  
  打到边缘，会自动吸进去，没气泡。

• hot_hot_hot (2012-3-20 15:21:52)

  
  也可考虑是不是盖玻片不干净

• jujuba (2012-3-20 15:22:27)

  打到边缘，会自动吸进去，没气泡。
  
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  一般加个10ul左右在计数板上就够了，如果有气泡可能是计数板和盖玻片没搽干净有杂质……

• jkobn (2012-3-20 15:22:44)

  
  我们都用黄枪头，加进去后，枪头还留有液体的，从来没有气泡的，10ul的枪头需要将枪头内液体全部打出，很容易有气泡的

• yhz1973 (2012-3-20 15:23:15)

  
  我们在细胞计数的时候很少出现有气泡的情况啊，基本上当枪头触到边缘处，液体就自动吸入了，楼主如果再出现有气泡的现象，可以这样做：现计数现洗板，让玻璃板比较润，但一定没有水；枪头尽量在靠近载玻片的中部位置打下即可。

• one (2012-3-20 15:23:35)

  
  我用10ul枪头取大概4，5ul细胞悬液就不会产生气泡，我觉得是你的玻片不干净，擦洗的时候可以不用纱布，纱布容易有毛屑，枪头抵在玻片的边缘但不要打到玻片上面，液体会进去的，祝顺利！

• one (2012-3-20 15:29:27)

  一般加个10ul左右在计数板上就够了，如果有气泡可能是计数板和盖玻片没搽干净有杂质……
  
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  同意这个说法，有杂质。
  但是我有一个疑问,细胞计数加的量不是一定的吗？就是10ul，要是量变了的话，那层液体的厚度就变了，一定体积内细胞的量就会改变，计数的结果也会随之改变。

• 8s5g (2012-3-20 15:29:47)

  加盖玻片的目的就是把计数格内的空间厚度固定在0.1mm，让细胞悬液从边缘吸进去，体积不会有变化的

• newway (2012-3-20 15:30:28)

  我也是用黄色枪头加，打到边缘，液体自动吸进去，很少有气泡

• ha111 (2012-3-20 15:32:32)

  
  晕，我们都是滴一大滴上去，楼上说得对，盖玻片盖住了就能保证体积恒定，这个就不用过多操心了

• glass (2012-3-20 15:32:58)

  
  谢谢大家。可能问题真的出在我的盖玻片不干净上了。我下次仔细洗干净。还有用10ul枪头应该没什么关系的吧？呵呵。真感谢各位的热心啊

• is2011 (2012-3-20 15:33:21)

  
  恩。先盖片，再加样。注意玻片干净无杂质。

• wsll (2012-3-20 15:33:40)

  
  加的时候可以倾斜下计数板，向加液的方向，加完后再倾斜过来，这样就不容易产生气泡了

• wsll (2012-3-20 15:34:17)

  
  最大的可能性就是盖玻片不净所致，建议好好擦一擦应该就没问题了。液体体系没太大关系的，只要保证液体能完全充满盖玻片就可以了，通常都是用10ul

• 131415 (2012-3-20 15:34:40)

  血球汁数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽所构成的3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度应有两种：一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开)，而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开)，而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
  
  计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1／4000mm3。
  
  使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每mL菌液(或每g样品)中微生物细胞的数量。
  
  已知：1mL体积＝10mm×10mm×10mm＝1000mm3
  
  所以：1mL体积应含有小方格数为1000mm3／(1／4000mm3)＝4x106个小方格。即系数K＝4x106。因此：每mL菌悬液中含有细胞数=每个小格中细胞平均数(N) x系数(K) x菌液稀释倍数。
  
  所以为不要使计数区两边平台沾上悬液，以免造成计数区深度的升高。也不要用枪吹打，以免产生气泡。轻打使枪头悬挂一滴，然后放置玻片边缘使其虹吸进去就不会有气泡。

• orangecake (2012-3-20 15:34:59)

  
  我也感觉是计数板和盖玻片不干净。也感谢大家的好建议。

• 969 (2012-3-20 15:35:20)

  
  速度别太快了