[求助]Hep3B细胞的培养

最新回复

• zzzz (2012-5-28 15:19:19)

  
  好像不是很正常啊
  实验室长辈说3B是最贱的细胞，很好养，我养的3B疯长，就DMEM＋10％FBS＋1％P/S，随便一消化，很容易脱壁，很容易吹散，有时候一天就黄了，这是随便拍的一张
  注意密度不要太稀，其他的都还好啊

  
  72807859.snap.jpg

• zzzz (2012-5-28 15:20:03)

  
  发一张我养的细胞图片，请大家帮我看一下，这个细胞是不是生长形态有问题。

  
  94921806.snap.jpg

• zzzz (2012-5-28 15:20:21)

  
  再发一张高倍镜下的图片

  
  76383454.snap.jpg

• tuuu2 (2012-5-28 15:20:40)

  
  二楼的不知道你的细胞传过多少代了，你的细胞状态已经不是ATCC的细胞一个状态了，边缘特别明显，
  楼主的细胞基本还可以，但是这个细胞就是这样长得很慢得，而且比较难消化，吹散，我们一般是用含有EDTA得胰酶消化自然飘起，还有一种较好得方法就是等细胞消化快飘起来得时候倒掉胰酶，让剩余得胰酶消化较长时间

• 乌贼老弟 (2012-5-28 15:21:04)

  
  个人消化的心得是：当镜下观察，有几个细胞在眼前漂浮晃动，就已经消化的差不多了，这时中止消化，吹打很轻松

• bohe221 (2012-5-28 15:21:28)

  
  楼上的意思是Hep3B这种细胞消化的过一点会容易吹打，而且对细胞状态没有太大影响？另外传代的时候是不是多一点细胞长得会好一些？

• yes4 (2012-5-28 15:21:46)

  
  二楼的细胞更像HepG2的形态，HepG2是长梭型的，轮廓清晰，但我们实验室的细胞个头比较大，我不知道你的是不是细胞密度太大了，所以显得个小。楼主说的Hep3B确实不是很好养，此细胞轮廓不是很清晰，个头大，有点网状形式，细胞伸展得很开，生长也较慢，建议传代的时候细胞密度大点，1：2传吧。细胞显得有点脏，可能来源于血清,若是，可辛苦点将血清过滤一下，但也可能是细胞本来状态不好，凋亡较快的原因造成的，建议用FBS，且提高血清含量到15%培养一段时间后改为正常培养基。一般情况下血清刺激后细胞都能恢复过来的。
  祝你 成功！

• bohe221 (2012-5-28 15:24:09)

  
  谢谢大家，我现在试着将细胞按不同比例分别传代，消化的时候等细胞都自然从壁上脱落下来，吹打多几次尽量打散细胞。看看可不可以把细胞救回来。

• dotaaa (2012-5-28 15:25:19)

  我吹打很多次还是不能完全吹散细胞，显微镜下看到Hep3B还是三四个一团，三四个一团，有什么办法可以解决这个问题吗？

• 66小飞侠 (2012-5-28 15:25:46)

  
  我最近也才买回来这个细胞，用的是DMEM+10%的胎牛血清，感觉不是很好养，细胞贴壁不是很牢固，而且细胞里面有部分有空泡，不知道是不是状态不好，怎么调状态呢！？ 用15%的血清么！？

• bohe221 (2012-5-28 15:26:06)

  
  我试过1：2传代，细胞的确长得好一些了，但是消化后还是两三个一团。有人告诉我这种细胞消化时间不能过长，细胞生长也不能太满，大概长到60－70％就要传代了。

• 起个名字真难 (2022-7-13 15:43:05)

  请教我最近培养的hep3b和huh7间隙有很多黑色碎片，不知道是不是污染了