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[求助]Hep3B细胞的培养
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最近在养Hep3B细胞,培养液用MEM+10%FBS+1%P/S,是从别的实验室要来的,觉得状态不太好,细胞大小不一,轮廓也不清晰,而且细胞消化以后很难吹散,计数时发现经常有几个细胞粘在一起成团。以前没有养过这种细胞,想请教一下养过的同志Hep3B的这种情况正常吗?养的时候应该注意什么?
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2012-5-28 15:19 作者: bohe221 来源: 分析测试百科网
最新回复
zzzz (2012-5-28 15:19:19)
好像不是很正常啊
实验室长辈说3B是最贱的细胞,很好养,我养的3B疯长,就DMEM+10%FBS+1%P/S,随便一消化,很容易脱壁,很容易吹散,有时候一天就黄了,这是随便拍的一张
注意密度不要太稀,其他的都还好啊
72807859.snap.jpg
zzzz (2012-5-28 15:20:03)
发一张我养的细胞图片,请大家帮我看一下,这个细胞是不是生长形态有问题。
94921806.snap.jpg
zzzz (2012-5-28 15:20:21)
再发一张高倍镜下的图片
76383454.snap.jpg
tuuu2 (2012-5-28 15:20:40)
二楼的不知道你的细胞传过多少代了,你的细胞状态已经不是ATCC的细胞一个状态了,边缘特别明显,
楼主的细胞基本还可以,但是这个细胞就是这样长得很慢得,而且比较难消化,吹散,我们一般是用含有EDTA得胰酶消化自然飘起,还有一种较好得方法就是等细胞消化快飘起来得时候倒掉胰酶,让剩余得胰酶消化较长时间
乌贼老弟 (2012-5-28 15:21:04)
个人消化的心得是:当镜下观察,有几个细胞在眼前漂浮晃动,就已经消化的差不多了,这时中止消化,吹打很轻松
bohe221 (2012-5-28 15:21:28)
楼上的意思是Hep3B这种细胞消化的过一点会容易吹打,而且对细胞状态没有太大影响?另外传代的时候是不是多一点细胞长得会好一些?
yes4 (2012-5-28 15:21:46)
二楼的细胞更像HepG2的形态,HepG2是长梭型的,轮廓清晰,但我们实验室的细胞个头比较大,我不知道你的是不是细胞密度太大了,所以显得个小。楼主说的Hep3B确实不是很好养,此细胞轮廓不是很清晰,个头大,有点网状形式,细胞伸展得很开,生长也较慢,建议传代的时候细胞密度大点,1:2传吧。细胞显得有点脏,可能来源于血清,若是,可辛苦点将血清过滤一下,但也可能是细胞本来状态不好,凋亡较快的原因造成的,建议用FBS,且提高血清含量到15%培养一段时间后改为正常培养基。一般情况下血清刺激后细胞都能恢复过来的。
祝你 成功!
bohe221 (2012-5-28 15:24:09)
谢谢大家,我现在试着将细胞按不同比例分别传代,消化的时候等细胞都自然从壁上脱落下来,吹打多几次尽量打散细胞。看看可不可以把细胞救回来。
dotaaa (2012-5-28 15:25:19)
66小飞侠 (2012-5-28 15:25:46)
我最近也才买回来这个细胞,用的是DMEM+10%的胎牛血清,感觉不是很好养,细胞贴壁不是很牢固,而且细胞里面有部分有空泡,不知道是不是状态不好,怎么调状态呢!? 用15%的血清么!?
bohe221 (2012-5-28 15:26:06)
我试过1:2传代,细胞的确长得好一些了,但是消化后还是两三个一团。有人告诉我这种细胞消化时间不能过长,细胞生长也不能太满,大概长到60-70%就要传代了。
起个名字真难 (2022-7-13 15:43:05)
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