[求助]MTT实验测的吸光度值是多少？

最新回复

• sunnyB (2012-7-31 14:10:23)

  
  请问楼上的细胞密度是每孔多少个啊？

• TAT (2012-7-31 14:10:40)

  
  我也在做MTT，通过酶标仪出来的数据就象上表的格式，但不知这些数据如何处理，只知道采用t检验。我是新手，刚做有关MTT的实验，请各位多多指教！

• yapuyapu (2012-7-31 14:10:59)

  按分组，求平均值，根据公式：抑制率=（空白组-处理组）/（空白组-调零组）； 在根据抑制率求IC50 值

• hulu呼噜 (2012-7-31 14:11:22)

  一般是这样的值：
  
  Endpoint Read Test Wavelength: 570 , Blank Subtracted                        
    1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12
  A  0.944  1.107  1.041  1.065  1.005  0.86  1.243  1.355  1.402  1.342  1.381  1.265
  B  0.764  0.811  0.764  0.739  0.745  0.525  1.003  1.166  1.169  1.085  1.073  1.161
  C  0.802  0.731  0.701  0.717  0.645  0.423  0.958  1.154  0.971  0.923  1.03  1.264
  D  0.856  0.758  0.729  0.766  0.59  0.498  0.93  1.174  1.062  1.069  0.946  1.037
  E  1.335  1.241  1.269  1.195  1.029  0.897  1.412  1.408  1.63  1.515  1.72  0.126
  F  1.018  0.896  0.845  1.103  0.9  0.739  1.194  1.352  1.414  1.2  1.309  -0.103
  G  0.868  0.871  1.028  1.135  0.788  0.679  1.192  1.207  1.123  1.018  1.192  -0.158
  H  1.131  1.128  1.06  1.185  0.995  0.847  1.368  1.443  1.465  1.487  1.384  0.134
  
  ——————————————————————————————————————————————————————
  
  你的数据是不是有点高啊？你一直都是这样的吸收度嘛？有些书上说490nm测定吸收度，和570nm有什么区别嘛？
  请指教。
  一般紫外法（用uv）测定的时候要求吸收度在0.2-0.8范围内比较准确，你这个都已经超过1.0，是否合适呢？
  
  我也是新手，我测的数据（570nm）大概在0.4-0.8之间。希望都交流。谢谢

• owanaka (2012-7-31 14:11:44)

  由于是5.1节，我有几天没有上网了，给自己放了假，不好意思现在才来感谢！谢谢，我收到的邮件（来自zyq1980@163.com）也一定是您发来的吧。我打开了邮件，并且成功的使用了您给的计算IC50，万分的感谢！

• DDD (2012-7-31 14:12:03)

  
  我看文献上都采用平均值±标准差表示的啊，而且也说采用t检验，是不是这个公式也可以算呢？？
  　　　　　　　　　　对照孔测定的平均OD值一加药组测定的平均OD值
  肿瘤细胞杀伤率(%)= -----------------------------------------------------------------------　　　 对照孔测定的平均OD值
  
  再乘100％。还有一个问题：吸光度值是不是就是OD值？这里的对照孔是只含培养液的孔吗？还是含有细胞的空白组？？请多多指教！

• DDD (2012-7-31 14:12:20)

  
  我的数据在570下测的都是一点多，二点多的？？怎么办啊

• lgm (2012-7-31 14:12:43)

  请问，具体怎样根据抑制率求IC50 值?
  
  同问这个问题。
  
  书上说，OD值与药物浓度的对数做曲线，求IC50 值，可是怎么求呢？
  
  谢谢

• kswl870 (2012-7-31 14:13:00)

  
  我也觉得很奇怪,前面看到不少战友都说MTT的OD应该在0.7-1.25之间线性比较好.也的确看到了有文献是这么写(英文),用这么高的OD做增殖曲线的(中文).
  但是按照仪器分析书上讲法,分光光度计的吸光度不是应该落在0.2-0.8之间时线性才比较好么?
  这样两者就有矛盾了啊.
  请教有经验的前辈.

• lgm (2012-7-31 14:13:24)

  请问，具体怎样根据抑制率求IC50 值?
  
  ——————————————————————————————————————————————————————————————
  
  应该是这样的，用处理组的OD值与浓度（一些列浓度）的对数做曲线，得到曲线方程，求空白组50％的OD值对应的浓度，应该是IC50 值。
  
  不知道对不对。

• 66小飞侠 (2012-7-31 14:13:41)

  
  我觉得OD值的大小与所给药物的作用强弱和作用时间长短有很大的关系，不一定要拘泥在某个数量范围之间，只要所测值与空白对照组相比有统计意义即可，统计方法好象还是oneway-anova要稍好些。所用的吸光度波长与所用的仪器特性及所用的细胞种类也有很大关系，应该参考已有文献资料摸索出适合自已实验的条件范围，不一定非要用某个值。

• yhz1973 (2012-7-31 14:13:57)

  我看文献上都采用平均值±标准差表示的啊，而且也说采用t检验，是不是这个公式也可以算呢？？
  　　　　　　　　　　对照孔测定的平均OD值一加药组测定的平均OD值
  肿瘤细胞杀伤率(%)= -----------------------------------------------------------------------　　　 对照孔测定的平均OD值
  
  再乘100％。还有一个问题：吸光度值是不是就是OD值？这里的对照孔是只含培养液的孔吗？还是含有细胞的空白组？？请多多指教！

• lgm (2012-7-31 14:14:15)

  
  请问，在mtt实验中，多少的抑制率才算抑制癌细胞的生长啊？才有意义再进一步验证啊？比如动物实验什么的。
  
  请各位高人指点啊！

• @STAR@ (2012-7-31 14:14:36)

  
  有计算IC50 的软件，直接输入抑制率和对应的药物浓度，软件自动会输出抑制率。
  

• @STAR@ (2012-7-31 14:15:01)

  
  在新药开发中，IC50值低于10uM，才有意义。

• @STAR@ (2012-7-31 14:15:22)

  
  对照组可以选择空白组，也可以选择溶酶组，我平时用0.2%DMSO 作为溶酶组

• orangecake (2012-7-31 14:15:47)

  
  由于是5.1节，我有几天没有上网了，给自己放了假，不好意思现在才来感谢！谢谢，我收到的邮件（来自zy***@163.com）也一定是您发来的吧。我打开了邮件，并且成功的使用了您给的计算IC50，万分的感谢！

• star#room (2012-7-31 14:16:11)

  
  I think ELISA Reader when work on MTT assay, it should be using OD 570nm. Long timeago, when we test MTT, we all use 490nm, but someday, some scientist said that
  490nm is not correct and we should use 570, them we all switch to 570. I do believe that the liner ranger for OD 570nm is locatede is 1.00 to 2.00. Any number greater
  or less then that is consider out of ranger, either you have too many of too few cells.