【求助】发酵罐小试问题

最新回复

• fei1226com (2012-10-20 15:17:03)

  小罐和大罐是有区别的，
  你的大罐条件是什么样的？？
  一般情况小罐的转速和风量应该是要比大罐高一些
  关系到溶氧问题和保温稳定等情况

• lixi559 (2012-10-20 15:19:14)

  QUOTE:

  原帖由 fei1226com 于 2012-10-20 15:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  小罐和大罐是有区别的，
  你的大罐条件是什么样的？？
  一般情况小罐的转速和风量应该是要比大罐高一些
  关系到溶氧问题和保温稳定等情况

  大罐的转数40rpm，风量400m3/h，我已经提高很多了。溶氧开始在百分之七八十，之后会下降，温度用的跟大罐一样的，41℃。

• kewanqi2011 (2012-10-20 15:19:43)

  接种量并不是越大越好，有时候菌体量太大反而会抑制菌体生长，保持原样试试。

• lixi559 (2012-10-20 15:20:05)

  QUOTE:

  原帖由 kewanqi2011 于 2012-10-20 15:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  接种量并不是越大越好，有时候菌体量太大反而会抑制菌体生长，保持原样试试。

  之前试过，结果连pH也没能达标，pH最高升到7.5-7.6，之后就升不上去了。

• 49888 (2012-10-20 15:20:36)

  加大氮源试试

• lixi559 (2012-10-20 15:21:00)

  QUOTE:

  原帖由 49888 于 2012-10-20 15:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  加大氮源试试

  是不是因为我加大了接种量，营养不够了呀

• u234 (2012-10-20 15:21:42)

  大罐的转数40rpm，风量400m3/h，我已经提高很多了。溶氧开始在百分之七八十，之后会下降，温度用的跟大罐一样的，41℃。...
  
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  既然知道溶氧，把小罐的溶氧调到和大罐一样，转速风量都增加，但不能只增加一个，因为还要考虑菌承受的剪切力情况，剪切力过大也不利于生长，还有罐压要考虑，跟大罐保持一致，
  楼主考虑下六楼说的情况，增加氮源是可以导致发酵液偏碱的，
  接种量也是不要无限增大，在合理的范围就行了

• idea2011 (2012-10-20 16:35:57)

  溶氧达不到，pH初始设为7吧。转速设的太低了。最高转速设为1000转（大罐转速不能太高是因为剪切力及功率的问题，小罐不存在这个问题），不过不知道你的培养基是什么，防止起泡，要不时加消泡剂，通气量每分钟和发酵液体积比设为1:1或者通气量更高一点也可以。如果是玻璃罐体还要保证罐内压力为一个大气压（玻璃罐体不耐压，不锈钢的应该没多大问题），还有你的OD600怎么会只有5.5，这也太低了吧。拿普通的营养肉汤或者LB都不止这个啊。接种量5%就差不多了。

• fei1226com (2012-10-20 16:38:48)

  1、你的培养基配方？
  2、你的培养工艺？包括搅拌、罐压、补料、pH调控、温度等都需要。
  有了上述两个东东，才能给你确切的建议，只有问题，没法回答……

• 小螺号 (2012-10-20 16:39:07)

  发酵参数的优化是个何很繁琐的工作，慢慢来。

• pencil菲 (2012-10-20 16:39:25)

  大肠长到5都成问题，我们大肠随便长长都是一百多的OD

• 8princess8 (2012-10-20 16:39:45)

  我觉得接种量不需要加大，这个应该不是主要的原因。你要注意比较发酵过程中大罐和小罐的过程参数的差异，比如OD、pH、DO等能检测的参数的变化趋势，试试从这些参数的差异中能不能找到原因。

• jrwyyplt (2012-10-20 16:40:08)

  1、你的培养基配方？
  2、你的培养工艺？包括搅拌、罐压、补料、pH调控、温度等都需要。
  有了上述两个东东，才能给你确切的建议，只有问题，没法回答……
  
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  培养基配方：玉米浆3.3%，KH2PO4 0.17%，MgSO4 0.033%，富马酸 0.83%，NaCl 0.2%，接种量 0.033%，有加消泡剂，罐体是玻璃的,pH7.0，温度40-42℃，没有补料，这些都是大罐上的，我照做的，只是把风量和转数提高了

• lixi559 (2012-10-20 16:41:07)

  既然知道溶氧，把小罐的溶氧调到和大罐一样，转速风量都增加，但不能只增加一个，因为还要考虑菌承受的剪切力情况，剪切力过大也不利于生长，还有罐压要考虑，跟大罐保持一致，
  楼主考虑下六楼说的情况，增加氮源 ...
  
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  大罐上没有溶氧电极......转数风量两个都增加了的，我刚做了加大氮源的，结果比以前要稍微好些

• remenb (2012-10-20 16:41:35)

  溶氧达不到，pH初始设为7吧。转速设的太低了。最高转速设为1000转（大罐转速不能太高是因为剪切力及功率的问题，小罐不存在这个问题），不过不知道你的培养基是什么，防止起泡，要不时加消泡剂，通气量每分钟和发酵 ...
  
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  培养基配方见下面的回答，灭菌前就在培养基里加消泡剂了。发酵液体积为3L，通气量设定的为5L/min，会不会大了？昨天将转数提到300rpm，结果比以前稍微好些，可OD还是不达标，罐体是玻璃的。我想着是不是培养基配方就有问题啊

• xingyi08 (2012-10-20 16:41:55)

  OD值达不到说明培养条件对菌体有影响，放大的时候转速风量都要按经验公式来放大，比如保持VVm相等，按照搅拌桨线速度放大等等，如果转速过大对菌体伤害较大，应为大肠杆菌还是比较脆弱！另外，看看你的培养基什么的是不是有变化，或者菌种的问题，做下摇瓶实验呢？要从全面考虑小试失败的原因，还有其他很多原因，是否染菌，灭菌温度是否过高破坏培养基，放大是否合理，还有就是设备的检修等等！

• xingyi08 (2012-10-20 16:42:14)

  另外消泡剂是不是加的多了？也有影响的哈！

• qqq111 (2012-10-20 16:42:37)

  我不会跟你扯什么公式，根据经验，大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以，初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300，通气适当小点设个2L就可以了，后期根据生长需要慢慢隔1-2小时稍微加大点通气量，同事慢慢100  100的调转速，直到最终转速到1000  ，这个过程只是一个大概的过程。因为你们那边好像没有溶氧电极。
  另外大肠杆菌没有那么脆弱，小罐上的拿点剪切力还是可以承受的，楼上的如果没做过大肠杆菌发酵请不要根据自己的想法误导别人

• zhezhe (2012-10-20 16:42:58)

  看了你的培养基配方了，接种量太少了，发酵罐一般5%-10%接种，0.03%接种不知道是个什么概念。为什么选择40-42℃发酵，会不会是因为大罐的散热系统做的不好，一般大肠杆菌发酵都是37或37以下。培养基中有玉米浆，你怎么确定你的菌浓。
  还有一点就是你培养基氮源基本没有，参考别的文献，建议你氮源可以 添加 无机氮源硫酸铵 或者 条件好 添加蛋白胨 或者 氨水 或者 硝酸钾 或者大豆粉。
  之前你说你添加氮源，OD好一点了，可能是你的氮源添加的太少了 ，蛋白胨等有机氮源添加 1%的量试一下。

• windy+++ (2012-10-20 16:43:20)

  你的培养基中前期可以单独加一点葡萄糖 和 蛋白胨或者硫酸铵，蛋白胨直接发酵罐灭菌，葡萄糖自己那个单独的瓶子 配成水溶液（这个没太多要求，溶解了就可以 115℃灭菌20分钟），就是让细菌首先利用速效碳源和氮源先生长起来，再利用慢速碳源 玉米浆，玉米浆组要提供碳源，如果对补加多少氮源没数，可以将氮源配成溶液用补料瓶慢慢流加，细菌应该不难长