【求助】含8M尿素的样品能直接上样做SDS-PAGE吗？

最新回复

• wood533 (2014-1-09 11:33:37)

  
  没问题啊，要是盐酸胍就不行了

• eric930 (2014-1-09 11:33:56)

  
  可以的，盐酸胍的就需要处理一下再上样

• 3648755 (2014-1-09 11:34:16)

  
  哦，谢谢你们的解答，那加入尿素后不会影响SDS-PAGE的电泳系统的pH吗？用不用透析除去尿素？

• skytree (2014-1-09 11:34:38)

  电泳时样品不用透析，只是条带可能没有不含尿素的样品漂亮。
  样品中的尿素不会影响到电泳体系的pH，因为电泳体系的缓冲能力很强，尿素的那一点弱碱性根本撼动不了体系pH。你看一看制胶、上样缓冲液的配方就明白了。

• wsll (2014-1-09 11:34:59)

  可以直接上样，我每次都是这么做的，没有任何影响

• xyw5 (2014-1-09 11:35:43)

  请教一个SDS-PAGE的问题，急求答案：含8M尿素的样品能直接上样做SDS-PAGE吗？8M尿素的pH应该是碱性的吧，对SDS-PAGE系统肯定会有影响是吧。请各位知道的兄弟姐妹帮帮忙！先谢谢了。
  
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  直接跑没问题。
  盐浓度高的会向低浓度的地方扩散，所以如果同时有多个样品条带，边上的会歪。（可以在两边各加1条同浓度的空白来压住你的8M的样品）

• yes4 (2014-1-09 11:36:06)

  
  我近来跑的都是尿素变性样，完全不会影响！可能和跑胶系统也有关吧！我们实验室里用的是Tris-Tricine系统（缓冲液分阴阳极），而不是甘氨酸系统（只用一种缓冲液）！Tris-Tricine系统似乎对盐浓度等不太敏感。如果觉得甘氨酸系统跑得不好看的话，不妨换这种系统试试！

• 3648755 (2014-1-09 11:36:57)

  
  哦，谢谢yes4的宝贵意见，我们实验室也是用的Tris-Tricine系统，只是没有跑尿素变性样，我的肽样不在实际位置，偏大了好多，在胶上显示很粗的带，我在想我的东西会不会在沉淀里，所以想加点尿素再跑一次试试，还没跑，等有了结果我再回来反馈呵

• MYX1234 (2022-3-20 14:06:28)

  请问楼主 上样前加loadingbuffer 还需要煮沸吗

• chenzhen2016 (2023-7-14 16:58:04)

  含有8M尿素的样品并不适合直接上样进行SDS-PAGE。尿素是一种强变性剂，可以在蛋白质样品中断裂氢键，从而使蛋白质变性并解离成单独的亚单位。然而，尿素对SDS-PAGE系统会产生一些负面影响。
  
  首先，尿素对电泳缓冲液的pH值具有影响。尿素在水溶液中呈碱性，当加入到电泳缓冲液中时，会使缓冲液的pH值升高。这可能导致蛋白质在电泳过程中的定位和迁移受到影响。
  
  其次，尿素会干扰SDS-PAGE胶的聚合过程。尿素的存在可能导致聚丙烯酰胺（SDS-PAGE胶的主要成分之一）聚合不完全或形成不均匀的胶体结构，影响电泳分离的准确性和重复性。
  
  因此，如果您需要进行SDS-PAGE分析，建议将含有8M尿素的样品进行蛋白质沉淀或尿素去除步骤，以将蛋白质转移到适合SDS-PAGE的缓冲液体系中。常见的方法包括酸沉淀法、醇沉淀法、离心过滤法或使用蛋白质交联剂如戊二醛进行尿素去除。
  
  请注意，具体选择哪种方法取决于您的实验需求和样品性质。在进行实验前，最好根据实验目的和样品特性进行前处理，以确保获得准确可靠的SDS-PAGE结果。

• chenzhen2016 (2023-8-08 15:10:21)

  含有8M尿素的样品不适合直接上样做SDS-PAGE。尿素是一种变性剂，可以在蛋白质样品中解离氢键，从而使蛋白质变性，并且在一定程度上可以帮助蛋白质展开。然而，8M尿素的浓度非常高，可能会对SDS-PAGE系统产生影响。
  
  以下是一些原因和建议：
  
  1. 影响电泳分离： 高浓度尿素可能会影响电泳胶的稳定性和分离性能，导致分离不准确或失去分辨能力。
  
  2. 影响电泳迁移： 8M尿素可能会影响蛋白质的电荷分布，导致蛋白质在电泳过程中迁移速度异常。
  
  3. pH影响： 你提到的正确，8M尿素的pH可能会显著偏高，这可能对SDS-PAGE缓冲体系产生负面影响，甚至影响电极材料。
  
  针对高浓度尿素样品的处理，你可以考虑以下方法：
  
  1. 蛋白质沉淀和浓缩： 尝试使用适当的蛋白质沉淀方法，如三氯乙酸沉淀或醇沉淀，以去除尿素，然后用适当的缓冲液（如Tris-HCl）重溶。
  
  2. 离心柱（Desalting Column）： 使用离心柱进行缓冲液交换，以去除尿素和其他变性剂，然后用适当的缓冲液进行重溶。
  
  3. 尿素梯度洗脱： 尝试使用逐渐降低尿素浓度的梯度洗脱，逐步将样品转移到低浓度尿素缓冲液中，然后再用于SDS-PAGE。
  
  在进行任何处理之前，最好根据实验需要和样品特性仔细考虑哪种方法最适合。如果实验结果对你的研究至关重要，最好事先进行小规模的试验，以确保处理方法的有效性和适用性。如果你不确定如何处理样品，可以咨询实验室同事、导师或专业技术支持。

• chenzhen2016 (2023-8-18 16:23:33)

  含有8M尿素的样品不适合直接上样做常规的SDS-PAGE，因为尿素的高浓度和碱性可能会对SDS-PAGE的分离效果产生影响。尿素在高浓度下会影响凝胶的结构和稳定性，可能导致蛋白质样品无法得到准确的分离。
  
  如果你需要在含有8M尿素的条件下进行蛋白质分析，可以考虑使用其他适合这种条件的技术，比如尿素PAGE（Urea-PAGE）或者IEF（等电聚焦）。尿素PAGE适用于在尿素存在下进行蛋白质分离，而IEF可以在不同pH条件下分离蛋白质。
  
  如果你想要进行常规的SDS-PAGE，最好是将尿素从样品中去除或稀释至适当的浓度，以确保蛋白质样品可以在SDS-PAGE中正确分离。在SDS-PAGE之前，可以将样品通过透析或柱层析等方法去除尿素，使其适合进行常规SDS-PAGE分析。如有疑问，建议咨询相关领域的专家或同行，以确保你的实验能够获得准确的结果。