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【求助】SDS-PAGE小分子条带不见了
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如图12%的分离胶，4%浓缩胶。marker本应该有7条，最小的是18.4和14.4KD（失踪的就是这两个大小的带，样品中小于这个值的蛋白也看不见）。可是每次都只能看到5条。图中最下面一条线是溴酚蓝的位置，没有跑出去。
请问是什么原因？
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80071712.jpg
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-1-19 13:25 作者: babybabe 来源: 分析测试百科网
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最新回复
babybabe (2014-1-19 13:26:30)
这是我的电泳图
17446563.jpg
hustwb (2014-1-19 13:26:47)
cocacola (2014-1-19 13:27:08)
9900 (2014-1-19 13:27:35)
QUOTE:
同意。是胶的浓度不对了。检查一下丙烯酰胺的配制，干脆配点新的。sunnyB (2014-1-19 13:27:55)
单一浓度的胶的分辨率不高，特别是对小分子量的蛋白，梯度胶的分辨率就可以提升，建议用4－20％梯度胶试试。
131415 (2014-1-19 13:28:19)
15%分离胶试一下吧！
我也用的是fermentas的这个marker！
veiwu (2014-1-19 13:28:49)
我的SDS-PAGE出现奇怪的问题，电泳跑好后大的东西都集中在两层胶的分界处往分离胶下一点，下不来。而下来的东西又是模模糊糊，条带不清晰。出现问题是在我原有的30%丙稀酰胺液用完后，新配制的一批溶液后，后来把所有的溶液都换掉了，都无法解决问题。
ROSE李 (2014-1-19 13:29:12)
koook5695 (2014-1-19 13:29:40)
跑出去了~~
coolcool (2014-1-19 13:30:11)
这家的marker我就没看到过小分子亮的那两个带
15902739275 (2019-8-21 16:11:52)
chenzhen2016 (2023-8-10 11:04:23)
1. 样品准备： 小分子蛋白在SDS-PAGE中容易受到样品准备的影响。如果样品准备不当，可能会导致小分子蛋白无法进入凝胶或难以分离。
2. 凝胶浓度和聚丙烯酰胺浓度： 小分子蛋白在高浓度聚丙烯酰胺凝胶中容易迁移过快，使得它们可能在凝胶底部扩散而看不到。你可以尝试使用更低浓度的聚丙烯酰胺凝胶来解决这个问题。
3. 电泳条件： 电泳条件的设置也可能影响小分子蛋白的迁移。你可以尝试减缓电泳的电流或延长电泳时间，以便小分子蛋白有足够的时间迁移到凝胶上。
4. 缓冲液pH： 缓冲液的pH也会影响蛋白的电荷状态，从而影响它们在凝胶中的迁移。确保使用正确的pH条件。
5. 样品加载量： 小分子蛋白的加载量也可能影响它们在凝胶中的显示。过多的样品可能导致条带过于密集，使得小分子蛋白无法清楚地显示出来。
6. 蛋白结构： 有些小分子蛋白的结构可能导致它们不容易与SDS结合，从而影响它们在SDS-PAGE中的迁移。
如果你已经排除了上述因素，并且问题仍然存在，可能需要进一步详细的实验和分析，以确定造成小分子条带消失的确切原因。你还可以考虑咨询在SDS-PAGE技术方面有经验的同行或专家，以获取更具体的指导和建议。
chenzhen2016 (2023-8-18 16:11:43)
1. 样品加载量不足：如果加载的样品量过少，特别是对于低分子量蛋白，它们可能不会形成明显的带子。确保你加载足够的样品量，尤其是对于低分子量的目标蛋白。
2. 电泳时间不足：低分子量的蛋白可能需要较长的时间来跑出。尝试延长电泳的时间，以确保低分子量带子能够迁移出胶。
3. 电泳电流不足：如果电流设置得太低，可能会导致蛋白质在胶中迁移不足，特别是对于低分子量蛋白。确保使用适当的电流条件。
4. 胶的制备问题：如果凝胶制备过程中有问题，比如凝胶聚合不均匀、凝胶老化等，可能会导致带子缺失。确保你的凝胶制备过程是正确的。
5. 电泳缓冲液问题：电泳缓冲液的pH和离子浓度对电泳效果有影响。确保使用正确的缓冲液，并检查是否存在pH偏移或离子浓度异常。
6. 电泳系统问题：电泳系统本身可能存在问题，比如电极不均匀、电泳槽电流分布不均等。确保你的电泳系统正常运行。
7. 蛋白质结构问题：某些蛋白质可能由于其自身的特性而在SDS-PAGE条件下迁移异常，导致带子不明显。这种情况可能需要进行其他分析确认。
8. 试剂问题：尝试检查使用的试剂是否正确，例如样品缓冲液是否与凝胶电泳缓冲液相兼容。
综合考虑以上因素，你可以逐一排除问题，并进行一些小规模试验来找到问题的根本原因。如果问题持续存在，可能需要进一步的实验优化和仪器检查。
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