【求助】pvdf 干了影不影响效果

最新回复

• vvmmoy (2014-2-05 21:36:46)

  
  最好不要干了，短期保存可以浸泡在TBST中置于4度（一周内），－20℃可以保存更久。一般一张膜检测3－4个左右的抗体是没问题的。当然，一定要根据你的抗体的质量具体来定，比如：actin可以在杂完5个抗体之后再杂都可以。笔者有一次将一张膜干燥状态下室温放置一周后杂actin居然ok。

• biabiade (2014-2-05 21:37:14)

  
  我来告诉你，干或者湿的都可以，转膜后使其干燥后封闭会提高灵敏度，也就是说更多的蛋白会留在膜上。ECL发光时也可以使其干燥，效果不错。
  来自millipore 蛋白手册以及其ppt的讲义，我的信号弱时查到的。

• owanaka (2014-2-05 21:37:38)

  
  不能干，膜和蛋白性质都会受影响的。
  楼上两位的做法虽然也的确可以出结果，但是这种结果就比较不可靠了。
  这样做出来的DATA估计像样的杂志是不会接受的（当然如果他们知道的话）。
  反正我们实验室是绝对避免膜干的，当然反复使用过多也不好。

• biabiade (2014-2-05 21:38:08)

  
  不把家底拿出来，没有人信服。

  
  40548345.jpg

• biabiade (2014-2-05 21:38:32)

  
  你看看怎么保存知道了吧，呵呵

  
  27451568.snap.jpg

• biabiade (2014-2-05 21:38:54)

  
  wet out是什么意思啊，Remember to wet out membrane before blocking step!
  怎么个意思啊，是不是封闭之前要在甲醇中湿润还是在封闭液中湿润啊

• nikun230 (2014-2-05 21:39:21)

  
  有试剂可以去除一抗二抗，接着再进行WB，不影响后续操作。如果保存的话，最好别干。如果干了，再用时要在甲醇中浸泡

• tie8 (2014-2-05 21:41:44)

  
  实验室有人说dry了以后就没有信号了
  但是你去看minipore PVDF膜自带的说明书
  里面写了一种很变态的western方法, 其中重要的一步就是把膜弄干
  但是我没有亲自试过, 仅供参考

• lixi559 (2014-2-05 21:42:08)

  
  我们实验室的Western Blot也很忌讳干膜，说干了膜背景会很重，所以每次我都很小心，连裁剪PVDF膜的时候也在PBST中弄。记得有一次重新将PVDF膜孵育抗体时出现了干膜的情况，结果背景很重，可能真的干膜对曝光的背景还是有影响的。