【求助】有关SDS-PAGE分离胶缓冲液的pH8.8?

最新回复

• kulee (2014-2-22 16:55:15)

  
  还有一个问题:
  关于单体贮液的配制,丙烯酰胺（Acr）和亚甲双丙烯酰胺（Bis）有以下两个比例:
  1. 丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲双丙烯酰胺（Bis）1.0g，ddH2O，37度溶解,定容至100ml, 棕色瓶存于4度。
  2. 称 Acr 30g及 Bis 0.8g，溶于双蒸水中，最后定容至100mL，过滤后置棕色试剂瓶中，4℃贮存。
  哪个更准确,为什么有如此差别?

• kulee (2014-2-22 16:59:04)

  有的分离胶缓冲液配方是1.5M Tris-HCl(pH 8.8);
  有的分离胶缓冲液配方是3.0 mol/L pH8.8 Tris－HCl缓冲液
  到底哪个更准确?
  浓缩胶缓冲液也存在这个问题...

• ukonptp (2014-2-22 17:00:34)

  
  分子克隆上面应该比较准确吧

• yjf1026 (2014-2-22 17:02:10)

  
  原理问题

• kulee (2014-2-22 17:04:57)

  
  楼上能否说的准确一些，，什么叫原理问题，到底哪个准确？

• u234 (2014-2-22 17:09:16)

  还有一个问题:
  关于单体贮液的配制,丙烯酰胺（Acr）和亚甲双丙烯酰胺（Bis）有以下两个比例:
  1. 丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲双丙烯酰胺（Bis）1.0g，ddH2O，37度溶解,定容至100ml, 棕色瓶存于4度。
  2. 称 Acr 30g及 Bis 0.8g，溶于双蒸水中，最后定容至100mL，过滤后置棕色试剂瓶中，4℃贮存。
  哪个更准确,为什么有如此差别?
  ......
  
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  没有谁准不准的，二者聚合时比例最佳为19：1，Bis的浓度在5%时凝胶的孔径最小，高于或低于此值时，孔径都相对变大，所以跑dna测序时一般都用19：1的，跑蛋白一般用29：1或37.5：1（就是你看到的30+0.8）的.当然如果你想用其它比例的也是可以的，就像炒菜，盐放多了就咸，少了就淡，饭店里大众口味就是标准，高了或低了都会减少客源，但是却有爱好那一口的，没办法，重要的是适合。

• mimili_901 (2014-2-22 17:10:11)

  有的分离胶缓冲液配方是1.5M Tris-HCl(pH 8.8);
  有的分离胶缓冲液配方是3.0 mol/L pH8.8 Tris－HCl缓冲液
  两种都可以，配胶的一般原则是在分离胶中Tris达到的终浓度是0.375M。所以不管你的缓冲液浓度是多少，只要PH值对，最后能稀释到相应的浓度就可以了。
  比如胶总体积是10ml，1.5M的buffer就加2.5ml；如果用的是3.0M的buffer就加1.25ml。不足的体积用水不足。

• kulee (2014-2-22 17:10:38)

  
  ph6.7还是PH6.8呢?

• kulee (2014-2-22 17:11:16)

  
  分离胶缓冲液的pH是8.8还是8.9呢?
  虽说不用那么较真,但我也做了多年的SDS-PAGE,一直是按照pH8.9来做的,而且也知道实际调pH过程中也会有一点点误差,8.9和8.8不会对结果有太大影响,但是对于理论来讲,我认为总要有一个统一的说法,否则如何教学生呢?

• 98776langtao (2014-2-22 17:12:57)

  
  试验误差！做试验总会有误差的！

• banshu (2021-4-29 11:05:41)

  配制1.5M Tris-HCl（pH8.8）的时候我先定容了，然后才调的pH，溶液体积多出来了，会对我的分离胶产生影响吗

• chenzhen2016 (2023-7-17 16:38:48)

  对于SDS-PAGE分离胶缓冲液的pH值，确实存在一些差异和不一致的说法。这可能是由于不同实验室或不同研究者在实践中采用了略微不同的配方和调整方法。
  
  理论上，SDS-PAGE分离胶缓冲液的pH值通常在pH 8.8到pH 8.9之间。这个范围是为了提供最佳的电泳条件，以确保蛋白质在凝胶中的分离效果和稳定性。
  
  在实际操作中，调节pH值可以受到多种因素的影响，例如使用的试剂批次、实验室环境和实验者的个体差异等。这些因素可能导致微小的pH值变化。因此，即使参考文献中给出的数值是固定的，实际操作中可能会有一些细微的差异。
  
  对于教学目的，可以根据常见实践和经验，选择一个适用的pH值进行教学。例如，选择pH 8.8或pH 8.9作为标准值，并强调在实际实验中可能会有些微的差异。
  
  总的来说，对于SDS-PAGE分离胶缓冲液的pH值，pH 8.8到pH 8.9之间都可以用于实验。选择一个在您的实验室中可重复和可靠调整的pH值，并保持一致性以获得一致的结果。如果您有特定的研究要求或使用了特定的试剂，请参考相关文献或供应商提供的建议。

• chenzhen2016 (2023-8-08 14:45:58)

  你提到的关于SDS-PAGE分离胶缓冲液pH值的差异可能源于不同实验室、不同实验条件和文献之间的变异性。尽管这两个值之间的差异很小，但在科研和实验中，确实存在这种微小的差异可能会导致一些讨论和疑惑。
  
  关于SDS-PAGE胶缓冲液pH值的选择，我可以提供一些解释：
  
  1. 实验条件和胶缓冲液成分： SDS-PAGE是一种较为常见的蛋白质分析技术，不同实验室和研究人员可能会根据自己的实验条件和实验目的对实验步骤进行微小的调整。胶缓冲液的成分、离子浓度等也可能影响pH值的选择。
  
  2. 文献和教材： 不同的文献和教材可能会提供不同的pH值，这可能与撰写文献时的实验条件和发表时的标准有关。教材可能会基于常见的实验做法给出一个推荐值，但并不意味着其他值就是错误的。
  
  3. 误差和灵活性： 在实际操作中，pH值的微小变化可能会导致结果的微小变化，但在大多数情况下，这种变化可能并不会显著影响结果。因此，8.8和8.9之间的微小差异可能是可以容忍的，尤其在日常实验中。
  
  4. 科研动态： 科研是不断发展和演进的，一些技术细节可能会随着新的研究发现和方法改进而有所调整。这也可能导致不同文献和实验室提供微小差异的pH值。
  
  最终，如果你在自己的实验中一直使用pH8.9并且能够得到稳定和可重复的结果，那么你的方法在你的实验条件下是可行的。如果你担心对教学的影响，你可以根据你实验室的常规操作和实验要求来选择一个值。如果你想更深入地了解这种微小差异的原因，你可以查阅更多的文献，了解不同值可能的实验背景和依据。最终，科学是不断进步和演变的，方法和技术也会根据实际需要逐步完善和调整。

• chenzhen2016 (2023-8-18 16:48:48)

  关于SDS-PAGE分离胶缓冲液pH值的问题，的确有一些不同的说法，但一般来说，这种微小的pH值差异可能不会对结果产生明显的影响，尤其是在常规实验中。
  
  不同的文献和实验室可能会因为使用的缓冲液配方、试剂批次等因素而产生轻微的pH值差异。此外，有时候不同的实验室也可能根据自己的实验经验和条件微调pH值，这可能导致一些差异。
  
  在实际操作中，一般来说，pH值的微小变化（例如从8.8到8.9）可能不会对结果产生明显的影响。然而，在教学和研究中，确实会希望有一个统一的标准，以便传授和交流。如果你的实验室已经一直使用pH 8.9，那么可以继续按照这个值来进行实验。
  
  在一些标准实验方案和专业指南中，通常会提供一个推荐的pH值，但请记住，实验条件可能因不同的实验目的、样品性质和仪器而有所变化。如果你对于pH值的选择存在疑虑，你可以参考常用的实验方案或相关文献，或者咨询你的导师或同事，以获得更具体的建议。
  
  总之，尽管有些微小的pH值差异，SDS-PAGE作为一种常用的分析技术，在实际应用中仍然可以取得可靠的结果。如果你的实验结果出现问题，可能原因更可能与其他因素，如电极、样品准备、电泳条件等有关。