【求助】转膜是否转过？

最新回复

• JK.jon (2014-3-03 10:48:06)

  
  我想你是做错了，转膜转完后的步骤跟ELISA是一样的，先封闭，再加一抗，反应后再加二抗，反应后用AEC显色，清水终止即可，不是用考马斯亮蓝染色的，你可以再试试。

• okhaha (2014-3-03 10:48:23)

  
  很简单，你用丽春红染膜，不然就用预染的Marker啊，另外还要注意膜的孔径哦

• 12xunmei (2014-3-03 10:48:42)

  
  1，二楼说的不对，考马斯亮蓝染胶目的就是为了看看胶上的蛋白电泳的情况，或者看看转膜后胶上蛋白转膜是否彻底。是westernblot的检验步骤之一
  2，nc膜比pvdf膜易转穿，不知楼主用的是什么膜？如果用pvdf膜，依楼主的大分子量蛋白一般不会转穿，当然电压和电流也有影响，同时电转液的ph值也有影响，ph大于9易转穿。
  3，同意三楼的说法，用丽春红染膜，可以观察蛋白是否转到膜上，丽春红脱色后在继续后续步骤，不影响结果。用预染的彩虹maker电泳也可以观察是否转穿----转穿的话，可以看到膜后面的滤纸上有maker的颜色，但是不能确认是都是哪些蛋白转过了，只能根据maker估计哪些转过。关于膜的孔径，一般pvdf膜有两种规格，0.2微米和0.45微米，一般小于20kd的蛋白采用小孔径膜，通常都用0.45微米的膜。
  希望我的建议能给你帮助，祝愿楼主顺利！
  也希望楼主能把后续的试验情况一起讨论，大家一起提高！

• ukonptp (2014-3-03 10:50:05)

  
  同意4楼的。
  你可以用两张膜同时转。就是在一张膜上直接再加一张膜，这样转出第一张膜的蛋白就会到第二张膜上。转弯后用立春红染两张膜看看就知道有没有转过了，再加上使用预染marker就知道目的蛋白的情况了。
  祝实验成功
  同4楼一样希望楼主把后续实验情况一起讨论，共同进步。

• any333 (2014-3-03 10:50:20)

  
  不要用coomassie染NC膜，否则根本洗脱不掉！

• S6044 (2014-3-03 10:50:39)

  
  谢谢各位的回答！
  二楼说的我都是这样做的，考马斯亮蓝染色我只是想看看转膜的效果！
  最近老是做不出来，在之前还做得比较漂亮，同样的条件后来就怎么也搞不出来了！！郁闷中。。。。。。

• S6044 (2014-3-03 10:50:55)

  一般转膜缓冲液的PH值是多少啊？我都没有检测过也

• any333 (2014-3-03 10:51:26)

  丽春红染液和脱色液配方是什么呢？？谢谢

• any333 (2014-3-03 10:52:30)

  
  转膜后就用丽春红染色吗？一定要脱色后才能做后面步骤吗？脱色后再封闭，孵1抗，2抗，显色吗？谢谢！

• huifeng0516 (2014-3-03 10:54:01)

  
  转膜后就用丽春红染色