【求助】WB实验中膜的正反面

最新回复

• yychen (2014-3-13 20:30:38)

  
  一般pvdf膜的正面是挨着胶的那面吧~如果有两张膜同时做封闭的话，注意把挨着胶的那边背靠背的放置，也就是最好不把两个膜的正面面对面的放置。
  也不知道说清楚没有~

• vvmmoy (2014-3-13 20:30:57)

  
  我们在做这个的时候都是靠胶的那面朝上

• chuntian1983 (2014-3-13 20:31:39)

  
  也没有什么严格规定，我 建议每次封闭，加一抗、二抗都
  只加一张膜，膜多了会互相有点影响的，而且封闭会不好。

• 王小主 (2014-3-13 20:32:50)

  我认为靠胶的那面是反面。在ECL发光的时候就要讲究正反面了，反贴法孵了A&B混合液后，再放在暗盒的保鲜膜里就是正面朝上。

• redbutterfly (2014-3-13 20:33:22)

  我觉得靠胶的那面是正面。一抗二抗都是上在这一面上。

• yychen (2014-3-13 20:33:44)

  
  没有那么多“我觉得”。
  转膜就是使用电力，将胶内的蛋白拉出来，遇到膜时吸附到膜上。所以，蛋白主要在靠胶这面，也就是这时正面。
  当然这类膜都是有孔的，孔径有0.45、0.22、0.1um等等。而蛋白的大小远小于它的孔径，所以蛋白也是有可能从孔穿到对面的。而抗体、BSA、ECL等小分子都可以透过孔从这面到另一面的。
  所以我觉得正反面不是很重要，我刚开始做的时候根本不注意这回事，也没有因为这个原因导致试验失败的。

• ROSE李 (2014-3-13 20:34:24)

  
  我用半干转膜，没注意过正反面，影响不大

• vcve (2014-3-13 20:34:46)

  
  我管靠胶的那面叫“蛋白面”，因为用丽春红染时，这一面的蛋白条带明显比另一面清晰。封闭、孵抗体和显影，这一面都向上。

• txwuyan (2014-3-13 20:35:20)

  
  Thermo的工程师来我们实验室做Western讲座时，我专门问了他膜正反面的问题。他说不用分正反面。我自己做Western也从来不分正反面，没出过什么问题。

• ffaa (2014-3-13 20:35:57)

  应该分面的。蛋白是转到膜的一面上，也就是靠胶的这面，在此后的孵育抗体时候，都要让这面充分接触液体，最后显色拍照都是拍这面的。