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【求助】western blot的PVDF膜用0.2um的还是0.4um的?
【求助】western blot的PVDF膜用0.2um的还是0.4um的?
各位大侠,我要做western blot,但公司说PVDF膜有两种,一种是0.2um的,一种是0.4um的,我要检测的蛋白一个分子量是185kD,一个是70kD,请问,我应该选哪种PVDF膜?应该根据什么来选呢?多谢帮助!
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最新回复
qhyu (2014-5-10 17:06:54)
PVDF市场上出售的一般有俩种:0.45μm孔径和0.2μm孔径,作用原理是疏水作用导致其强的蛋白质吸附性,一般来说均一的0.45μm孔径特别适合于10kD的蛋白质转印,0.2μm孔径适合10-20kD范围。
BUK (2014-5-10 17:07:34)
QUOTE:
0.45μm孔径和0.2μm孔径,一般来说0.45μm孔径适合于>20kD的蛋白质转印,0.2μm孔径适合<20kD的蛋白质转印。0.2μm孔径的PVDF膜吸附量会比较大,从而会导致背景很高!
解决办法:用封闭液的时候加倍,时间加倍!不行就三倍!可以降低背景!
c86v (2014-5-10 17:07:55)
我们公司一般用PVDF膜转印大于30kd的蛋白,PSQ膜用于小于30kd的蛋白
xue258 (2014-5-10 17:08:23)
孵育一抗和二抗的牛奶是什么浓度?
谢谢
831226 (2014-5-10 17:08:50)
0.45μm孔径和0.2μm孔径,一般来说0.45μm孔径适合于>20kD的蛋白质转印,0.2μm孔径适合<20kD的蛋白质转印。
0.2μm孔径的PVDF膜吸附量会比较大,从而会导致背景很高!
解决办法:用封闭液的时候加倍,时间加倍!不行就三倍!可以降低背景!
谢谢指正,我也是初学,根据公司得说明做得!我想问一下膜得孔径和蛋白子得KD成正比吗?不理解,是不是大分子量得蛋白需要大孔径!请楼上得从PVDF膜吸附原理来解释一下,大家也可以
yysr238 (2014-5-10 17:09:15)
cbou876 (2014-5-10 17:09:56)
1、原先我们用脱脂奶粉封闭的浓度是0.5%,为了减低背景,需要把封闭液的浓度加倍到1%,如果效果还是不好可以加倍到1.5%.
2、时间也要加倍,比如说,原先一小时,现在用两个小时。
为什么用0.2um的膜背景会很高,是因为蛋白的结合和膜的表面积有关,0.2um 的膜显然要比0.45 um的膜的内表面积大.所以我们在封闭的时候要加大封闭的量和时间,要尽量完全封闭.
cbou876 (2014-5-10 17:10:16)
我们公司一般用PVDF膜转印大于30kd的蛋白,PSQ膜用于小于30kd的蛋白
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你们什么公司?我想确认一下到底是多少?
gogo (2014-5-10 17:10:30)
Millipore公司的PVDF膜建议:分子量小于20KDa时用0.2um的PVDF膜
【求助】western blot的PVDF膜用0.2um的还是0.4um的?