【求助】丽春红染色的问题

最新回复

• guagua (2014-6-17 10:16:23)

  
  是很难溶。直接加水定容至1000ml，就全溶了。
  转膜后立春红染色，见到条带后TBS洗脱，奶粉封闭就可以了。不过感觉这样配的立春红好像不是很好洗脱一样。5％脱脂奶粉最后也被染成粉红色了。不妨碍后续操作。
  反应时间半分钟、1分钟？。很短时间就可以看见条带。
  用后我没有回收过，反正配了1000ml，估计western做完了也用不完。

• wood533 (2014-6-17 10:17:08)

  
  我们开始的丽春红很难洗脱，后来过滤后收集所得滤液来染色，再用TBST洗就好多勒。如果膜上有颜色，可能会影响后面结果。

• yonger (2014-6-17 10:17:25)

  
  没什么影响啊
  你丽春红检验完后有水洗几分钟,就算有一些颜色还在膜上,再你下面的封闭时间内也洗脱了

• 莲花白 (2014-6-17 10:17:50)

  确实如果膜上有些丽春红在上面，封闭的时候也可以洗掉。用预染Marker一般就不染了

• xyw5 (2014-6-17 10:18:27)

  可以回收的

• 04906 (2014-6-17 10:19:01)

  
  我也回收过

• BUK (2014-6-17 10:19:34)

  
  请教丽春红的配方？
  最近又重新配过了，还是不理想。把膜浸到丽春红里面，马上就整张膜都是红色的，蛋白条带倒是看不出来。前几次都以为没有转上去，把膜扔了，后来试了一下后续的步骤，倒是有条带的。等于丽春红完全没有起到指示作用。

• XYZQ (2014-6-17 10:20:25)

  丽春红染色液配方
  储存液：2%染料溶于30%（w/v）三氯乙酸和30%（w/v）磺基水杨酸中
  染液：用1%（v/v）乙酸按1:10稀释储存液。丽春红最终浓度为0.2%。
  这是我在Millipore的蛋白质印迹手册上看到的配方。我曾经用这个配方染过PVDF，然后测序，没有任何问题。但是不知道适合不适合你的实验。
  祝你顺利。

• lxh031 (2014-6-17 10:20:45)

  楼上的是按照分子克隆上的。
  我是称1.0g用1.0ml乙酸溶解，再定容到100ml。
  可以回收反复用，我这个配了3年了都还在用。
  染色后用DDW反复的洗几次，再用封闭液封闭过夜（最好放在摇床），都很干净了。
  我昨天还做了，效果都很不错。