【求助】western中怎样才能把条带跑得细一点？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-6-17 11:22 作者: abc816 来源: 分析测试百科网

样品是组织蛋白，上样量20ul（蛋白40ug），每次跑出来条带都散开的
用的是4％的浓缩胶，跑浓缩胶时看到溴酚蓝压的很细，跑到分离胶就会变粗好多，尝试过增加浓缩胶的长度及延长浓缩胶的凝固时间效果都不好，请教高手如何解决？谢谢。

vcve (2014-6-17 11:22:58)

曝光后片子上条带很粗吗？蛋白有多大？如果分离胶浓度高，跑的时候溴酚兰是会扩散的比较开。
u234 (2014-6-17 11:23:34)

我的也是
在浓缩胶跑得好好的
分离胶就有点散了
tuuu2 (2014-6-17 11:24:59)

有高人解决一下吗?我也是这种情况.
eve_49 (2014-6-17 11:27:41)

跟电泳槽有点关系,用BIO-RAID的随便跑,条带都很漂亮
zsxan1990 (2014-6-17 11:28:02)

注意电压了吗
duoduo (2014-6-17 11:28:33)

BIO-RAD的mp3是western的最佳选择，条带会很漂亮的
glass (2014-6-17 11:28:56)

我的情况也是这样,电泳的电压分别是80 和120V,电转是200MA,条带比较粗,不是那么细细的一条,不好看,请教高人.
abc816 (2014-6-17 11:29:33)

电压80和100V
转膜1mA/cm2
目标蛋白40－50kD
vcve (2014-6-17 11:30:08)

我觉得胶浓度太低了，用１０％的试试看
xue258 (2014-6-17 11:30:28)

会不会跟loading buffer有关系啊？
finger (2014-6-17 11:30:58)

我也出过类似的情况，我开始跑得很好，最近也是跑胶过程中溴酚蓝弥散，我估计可能是上样缓冲液的问题，不过并不影响考马染色和转印的结果。