查看完整版本请点击这里:
【求助】求助Tricine-sds-page
才学做Tricine-sds-page,有几个问题请教:【求助】求助Tricine-sds-page
1。 跑电泳时的电压(电流)是多大,是不是要根据胶的长和宽来计算?按V/cm或mA/cm计算?电压与胶的厚度有关吗?
我用的是六一厂的槽子,胶宽9cm,高7cm(不含梳齿)厚1.5mm。
2。电泳刚开始时跑得还好,示踪迹压成一条线,跑到分离胶的1/3时 开始弥散,并且跑得极其之慢,蛋白质也只跑到一半。
查看完整版本请点击这里:
【求助】求助Tricine-sds-page
【求助】求助Tricine-sds-page
最新回复
ladyhuahua (2014-6-17 15:00:35)
这个文章对小分子量蛋白的tricine-sds-page电泳有很详细的阐述。
不过根据我们的经验,电泳时在集层胶60v足够,分离胶中可以加到120v。你的胶比较厚,估计电压会更高。
到了分离胶有点弥散正常的,速度慢电压加大就是。
蛋白质只跑到了一半什么意思呢?考染看到的?
831226 (2014-6-17 15:01:20)
1.分离胶浓度是多大?适当降低浓度试一下。
2.电极缓冲液PH是否准确?
3.电泳应在4℃环境进行。
4.你的胶厚度是1.5mm,我们一般用1mm或0.75mm,你的目的蛋白分子量多大?
okhaha (2014-6-17 15:02:52)
这个文章对小分子量蛋白的tricine-sds-page电泳有很详细的阐述。
不过根据我们的经验,电泳时在集层胶60v足够,分离胶中可以加到120v。你的胶比较厚,估计电压会更高。
到了分离胶有点弥散正常的,速度慢电压加大就是。
蛋白质只跑到了一半什么意思呢?考染看到的?
......
===============================================================================================================
积层胶恒压30v,跑大约50-60分钟,分离胶恒流30mA,跑4h的时候溴芬兰跑了分离胶的三分之二,就跑的很慢很慢了。烤染后蛋白才跑到胶的三分之一。不过条带尚清晰。
831226 (2014-6-17 15:05:26)
okhaha (2014-6-17 15:05:50)
QUOTE:
问题是14。4kd的也只跑不动wood533 (2014-6-17 15:06:11)
831226 (2014-6-17 15:06:33)
【求助】求助Tricine-sds-page