查看完整版本请点击这里:
【求助】为什么western发光以后,marker也在胶片上
RT,我做western时候,用ECL发光,看到目的条带,在胶片上也看到marker的条带,应该来说是看不到才对啊,我看别人做的都没有,不知道什么原因?【求助】为什么western发光以后,marker也在胶片上
查看完整版本请点击这里:
【求助】为什么western发光以后,marker也在胶片上
【求助】为什么western发光以后,marker也在胶片上
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-6-17 16:48 作者: idea2011 来源: 分析测试百科网
最新回复
ritou1985 (2014-6-17 16:49:24)
说明你的marker好呗Smile,还有就是你老板有钱。
真的有这种marker的,本身不发光,但是其带有辣根过氧化物酶的或者是生物素(和链亲和素耦联)。这样在加上显影剂的时候就会发光了,不过大多国外文献用的是非发光的marker,这种产品都是在几千的,价格不菲,但是定位要正确些,我也曾经考虑过买这种,不过后来还是想到替老板省点吧。
我不知道你的是不是这种marker。请仔细看说明书。
如果不是这种marker ,那么你的实验就有问题了。看看那些带是不是真的是marker的位置,你可以把图贴出来看看嘛。
希望对你有帮助
鹿奔奔 (2014-6-17 16:50:03)
QUOTE:
。。。。楼主说的不是这种Marker,这种MARKER不显影才应该来求助就是一个非特异性显色的问题
(1)加强封闭。 加大牛奶浓度至10-15%
(2)减小1、2抗浓度,自己摸
(3)加强洗脱,增加次数或延长时间
不是大问题,改进后就不会了
ritou1985 (2014-6-17 16:50:36)
是否是发光marker楼主没说哦。万一他用的是师姐师兄留给他的发光marker呢?Smile
如果是非特异性带的话,在非marker泳道中应该更容易会有杂带。
最好还是能提供图和抗体稀释后的浓度度 再分析,WB环节很多,很难说就是哪一步的问题。
wmp1234 (2014-6-17 16:51:05)
我前一段时间也遇到过这种情况,后来改进:
1)延长封闭时间,24-48hr,冰箱。
2)降低二抗浓度,我由2千倍摸到了现在的2万倍。
祝好运!
kuohao17 (2014-6-17 16:51:32)
看到MARKER也是正常的,你用的一抗是多克隆抗体的话就可以在胶片上看到MARKER,如果是单抗,那就不可能在胶片上看到MARKER的。
whitesheep (2014-6-17 16:51:59)
我同意楼上的看法。我前几天刚做的WB结果很好,背景很浅没有非特异性条带,但片子上也能看到一条明显的marker条带,而且每次都能看到。我想是因为一抗是多克隆抗体,与marker里的一种已知蛋白发生抗原抗体反应所导致的。我想结果有特异性条带没有非特异性杂带就可以了,至于marker在片子上显影应该实验没什么关系吧!
再一个,我每次在转完膜后都用铅笔在膜上将marker的各个条带划一下有个痕迹好辨别,也可能这个痕迹存留一些二抗,与底物反应而发光在片子上留下影。
【求助】为什么western发光以后,marker也在胶片上