【求助】各位在做18cm 3－10的时候一向条件都是什么样的？

最新回复

• mamamiya (2014-6-17 17:11:27)

  
  没有什么不合理的。
  主要看你的样品，如果大分子量的蛋白多，就应该聚焦时间长一点（>80000vhr)，如果盐份多，脱盐时间稍微长点。都是根据自己的试验来作调整的。

• PINK (2014-6-17 17:19:34)

  
  楼主水化时间是多少啊？一般水化12-14h，主动被动都可以。
  然后，就是这个IEF程序电压升得太快，无论是快速还是缓慢升压恐怕都不太适合，应该考虑在1000-10000v这个范围多设几个电压梯度，从本人的经验来看，这个程序上不了10000v。
  另外，可以在末尾设一个低电压使蛋白质保持在聚合状态。
  祝实验顺利！

• guagua (2014-6-17 17:19:55)

  水化12h
  是能上到10000v的
  我只是觉得这个程序是不是VH数太高了?VH>100000了

• lxh031 (2014-6-17 17:20:14)

  
  我们是的
  30v 6h
  60v 6h
  200v 1h
  500v 1h
  1000v 1h
  8000v 0.5h
  8000v 50000vh
  但最后升压过程总是只能达到7900左右，达不到8000...希望能跟大家讨论！

• yapuyapu (2014-6-17 17:20:34)

  
  电压上不去最大可能就是盐离子。我建议的参数：
  0v 重泡胀 1h；
  30v 10h； step-on-hold
  500v 0.5h；step-on-hlod
  2000v 0.5h；Grediant
  5000v 0.5h；step-on-hold
  8000v 跑至 80000vhs，多设一点时间 20h。
  低电压除盐，中间一步Grediant，是为了保险起见，直接升压也可以。

• guagua (2014-6-17 17:21:10)

  
  我感觉我的总VH数过高了，正在做
  250v 30min
  1000v 1h
  10000v 1h
  10000v 50000vh
  不知结果如何
  有大侠说，vh数高了会产生横纹，同时也会产生纵纹
  横纹能理解，是因为电渗，纵纹怎么理解？

• yapuyapu (2014-6-17 17:21:36)

  
  18cm胶条上到80000vhs，不算高。50000vhs有点低。
  纵纹的产生和样品溶解不好或者由不溶性颗粒造成的。

• fsdd817 (2014-6-17 17:21:55)

  
  严重同意楼上的，我做17 cm胶，聚焦一步都是80 000 vhr。就是60 000vhr的时候有点聚焦不足。

• guagua (2014-6-17 17:22:14)

  
  你们是指总VH数还是仅仅是最后一步为80000。这还是有区别的吧
  我的程序中最后一步是50000，但是总VH数还是高于100000的

• yapuyapu (2014-6-17 17:22:44)

  
  是指最后8000v或10000v ，让这一步的vh达到80000（vhs）
  但是你说总vh超过100000，好象不对。你的参数最后一步，是10000v，5h；应该只到50000vh，加上前面的也超不过60000vh。

• toy (2014-6-17 17:24:53)

  
  不同样品的条件应该不同吧，有可比性吗？还是自己摸索条件吧。