【求助】关于竖条纹的问题

最新回复

• xiaoxiaoniao (2014-6-17 17:45:38)

  另附上图片

  
  24511534.jpg

• junhun (2014-6-17 17:45:56)

  
  据说是蛋白质沉淀的原因
  尤其在冷冻后上样

• xiaoxiaoniao (2014-6-17 17:46:15)

  那应该怎么样消除？

• mimili_901 (2014-6-17 17:46:34)

  
  个人认为是盐离子浓度过高导致的
  1 你在一向升压的时候设置低电压在100-150 伏2个小时
  2 应该不是DTT的问题
  3 看图像不光是两端有竖条纹，在平衡时可多加一些SDS
  4 不知你用TCA-丙酮洗过没有吸了几次，可增加吸的次数
  祝好运

• ladyhuahua (2014-6-17 17:46:56)

  
  两端的竖条纹是不可避免的，因为那是电极所在位置。
  其实你应该更多关注你中间的竖条纹，比较严重。你中间的竖条纹出现原因可能是：
  1、上样量太大。
  2、操作过程中不慎碰到了胶面。
  3、你这张胶很明显制的不均匀，中间都扭曲了。
  对了，你使用的莫非是线性ipg胶条？
  以上愚见，仅供参考。

• ero11 (2014-6-17 17:47:51)

  
  不是胶不均匀，是聚焦不好，看样子是线性胶条做的，试一下非线性看看
  先优化一下聚焦参数吧，
  蛋白溶解不充分或有不溶性颗粒也会产生竖条纹

• moonlight45 (2014-6-17 17:48:18)

  
  个人经验,竖条纹往往与不溶性杂质有关,在加入水化液上样前,高速10000g离心二十分钟,再上样,可能会有不错的结果.

• kswl870 (2014-6-17 17:48:35)

  
  可能原因及其解决方案:
  1.平衡时间不够,增长平衡时间,12-15min,两步.
  2.电渗透造成,平衡液中是否包括30%甘油,6M尿素,SDS;在第二向时吸掉胶条两端过多的水.
  3.电泳缓冲液有问题,准备新鲜的buffer.
  4.buffer的SDS不够,0.1%w/v SDS.

• zzzz (2014-6-17 17:49:22)

  
  在跑一向时的样品盐离子浓度可能过高，导致竖条纹的出现，还有就是不溶性物质的存在

• yychen (2014-6-17 17:50:02)

  
  垂直托尾的条纹可能的原因及解决的办法是二向电泳缓冲液缓冲液配制不当，SDS含量不足，使用新鲜配制的缓冲液，使SDS含量达到0.1％，对于水平SDS-PAGE而言发生了电渗现象，在平衡液中应添加甘油和尿素。

• wawa (2014-6-17 17:50:19)

  
  可能是上样前溶液中含有不溶性颗粒吧，建议上样之前离心一下。

• flower-201 (2014-6-17 17:50:36)

  
  个人认为该胶出现竖条纹的原因：１　蛋白上样量太大，高丰度蛋白过多，可以减少上样量或者对样品进行预处理试试；　２　如果是使用线性ＩＰＧ胶条，那建议用更窄范围的，因为你的蛋白点多分布在中间及偏碱性端．希望对你有帮助．

• 分子式 (2014-6-17 17:51:03)

  
  嗯，楼上分析的很对，我以前就遇到这些问题，总结一下可能就是这2两个原因，从这两个方面入手应该可以解决。好运！！！