【求助】血清蛋白跑SDS-PAGE应该怎么处理样品

最新回复

• zwsyrt (2014-6-19 09:41:23)

  煮沸的话样品凝集?我从来没有碰到过这个问题啊，虽然血清蛋白做的不多．
  有一种柱子专门除去血清中的高丰度蛋白，你可以考虑过完这个柱子后再走ｐａｇｅ胶

• XYZQ (2014-6-19 09:41:41)

  
  血清跑page？ 稀释50或100倍先，加入loading buffer变性，这时由于浓度变稀，就不会凝集了。完了再取10ul上样就行了
  不过你蛋白的丰度有点低

• redbutterfly (2014-6-19 09:42:12)

  
  这么低丰度的目标蛋白在高蛋白丰度的血清样品中确实很难做，应该做预处理纯化样品并提高目标蛋白的丰度。建议可用截留分子量为50KD的离心超滤管除去高分子量蛋白，再用截留分子量为3KD的离心超滤管除去低分子量物质（血清中存在的大量盐份可干扰电泳）并浓缩样品，最后再进行分析。

• viviwang1987 (2014-6-19 09:42:36)

  
  我的血清样品是大量的，如果跑柱子的话，我感觉意义就不是很大了。
  如果我把样品稀释50呗的话，那我那么低的蛋白含量还能跑出来么
  还有就是我跑胶跑的不好的话，可以接着做western么

• huifeng0516 (2014-6-19 09:43:07)

  这么低丰度的目标蛋白在高蛋白丰度的血清样品中确实很难做，应该做预处理纯化样品并提高目标蛋白的丰度。建议可用截留分子量为50KD的离心超滤管除去高分子量蛋白，再用截留分子量为3KD的离心超滤管除去低分子量物质（血清中存在的大量盐份可干扰电泳）并浓缩样品，最后再进行分析。
  
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  目前我也在为这件事情苦恼
  我也要做30左右ng/ml的蛋白。。WB和ECL号称pg级都能做出来，试试看

• mimili_901 (2014-6-19 09:43:28)

  
  可以将血清蛋白样品稀释１０倍后跑电泳效果应该还可以．
  另外，使用超滤管处理也是不错的方法，可以试一试，方法都不难，不需要耗费多少时间和资金的．

• huifeng0516 (2014-6-19 09:43:48)

  
  超滤管360块8个。。不算贵了。。

• duoduo (2014-6-19 09:44:12)

  QUOTE:

  原帖由 huifeng0516 于 2014-6-19 09:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  超滤管360块8个。。不算贵了。。

  有哪么贵?我这里好象20多30不到每个

• huifeng0516 (2014-6-19 09:44:36)

  QUOTE:

  原帖由 duoduo 于 2014-6-19 09:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  有哪么贵?我这里好象20多30不到每个

  啊啊啊。。我这里（上海）就是这么贵啊~~~4kd的

• zwsyrt (2014-6-19 09:45:00)

  
  最好做ELISA。

• huifeng0516 (2014-6-19 09:45:21)

  QUOTE:

  原帖由 zwsyrt 于 2014-6-19 09:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  最好做ELISA。

  我也想啊
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=6232926&sty=1&tpg=1&age=0')

• junhun (2014-6-19 10:11:18)

  如果是直接用血清上PAGE的话一定得稀释，否则蛋白浓度过高，一煮就会凝固，另外上样buffer可用4倍的，由于分子量较小，用12%的胶慢点跑看行不行，蛋白丰度太低了，不知能不能看到，脱色时间短一点，静止脱色。