【求助】我的PAGE条带为什么跑不下去？

最新回复

• standbyme (2014-6-19 13:04:38)

  
  不用SDS，我跑的是PAGE电泳，不是SDS－PAGE

• standbyme (2014-6-19 13:04:59)

  
  再说明一下：15％的胶样品停在上样处，12％和10％的胶跑下来一点。但浑浊的粗粗的一陀，分辨不清。

• standbyme (2014-6-19 13:05:15)

  
  你的电流有多少呢？
  会不会内槽没有夹紧
  可以120v跑20min，再用180v跑

• standbyme (2014-6-19 13:06:36)

  
  我的只能显示电压。请问电泳过程中电流、电压与跑胶的关系是怎样的？我还不太懂。请赐教！在线虚心学习！
  内槽应该是夹紧了的。
  有没有可能跑的时间还不够？因为溴芬兰已经没有指示作用了，所以也不知道什么时候能跑完啊！

• qqq111 (2014-6-19 13:07:17)

  我的样品是20KD－70KD的蛋白，用了15％的胶跑，跑不开。今天换了10％的和12％的胶还是停留在上样处，跑不下去。请各位帮帮忙，是怎么回事呢？我用的是那种国产的小电泳槽，3％的浓缩胶（45v）跑了半小时后换电压（147～150）跑了4个半小时后停止。
  10％胶是30％ACR1.665ml，pH8.8Tris－Hcl1.25ml，H2O2.35ml，AP和T均为25ul
  12％的胶是30％ACR2ml，pH8.8Tris－Hcl1.25ml，H2O1.75ml，AP和T均为25ul
  
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  你跑的是非变性电泳（native PAGE),这种情况我遇见过。在变性的SDS-PAGE时没有问题，但跑native PAGE时就是跑不下来。即便是减小胶的浓度效果也不明显。在排除操作和仪器的原因后，原因可能是样品中含有较多的核酸和脂类，（尤其是核酸）带负电，分子量也比较大，堵塞凝胶孔。建议对样品采用超速离心或者加入核酸酶处理。

• remenb (2014-6-19 13:07:51)

  制胶板周边有密封条吗？拆除了没有？

• xyw5 (2014-6-19 13:08:09)

  PAGE胶加了溴酚蓝应该一直有指示作用的吧

• flower-201 (2014-6-19 13:08:27)

  
  你的蛋白是不是碱性蛋白？
  你的浓缩胶是不是pH6.7？
  如果你的蛋白pI大于6.7在浓缩胶中就会带正电，当然不会往下跑喽。

• abc816 (2014-6-19 13:08:49)

  
  制胶板下面的密封条拆除了没有？ 这很关键喔，我有同学就因为这样，所以条带跑了很久也下不 去。

• standbyme (2014-6-19 13:09:36)

  撤除了。很感谢大家的积极帮忙想办法！

• wmp1234 (2014-6-19 13:09:57)

  上样前离心下试试

• vera+ (2014-6-19 13:10:29)

  
  我也觉得可能是样品问题，楼上说的对，不知道你电泳前样品离心了没有。

• standbyme (2014-6-19 13:10:45)

  
  加大电压和延长电泳时间后跑下去了，谢谢大家！