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【求助】请帮忙分析一下胶图

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-6-19 13:33    作者: nvdabing    来源: 分析测试百科网

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【求助】请帮忙分析一下胶图

跑2D 17cm胶条一相电压达不到预定的10000v,只能达到7000V 左右，总电压75000vhr。组织提取样品是用丙酮沉淀过夜的除盐，感觉PH4-8段点比较少。 一侧横纹较多。银染时背景较深，不知是否与显色时间有关。请帮忙分析一下有哪些问题，谢谢!
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  • mimili_901 (2014-6-19 13:33:57)


    1.你的胶银染时间过长，点有点发虚,背景深可能是操作时把胶面弄脏的原因，
    2.聚焦不好，可能还是盐离子的问题。可以重新考虑一下聚焦参数,在聚焦过程中也可以除盐的.

  • nvdabing (2014-6-19 13:34:21)

    我的样品的确有盐分，因为含血管较多，内面有血液可能未冲洗干净，但是我看有的并未用丙酮沉淀，如有国外文献肝脏的蛋白提取。不知什么样的组织需进行除盐。另外银染的显色时间掌握还不好，下次适当减少看看。但这样会有此点未显示出来，我的上样量约为400ug,是否偏大。请各位朋友不吝赐教。

  • mimili_901 (2014-6-19 13:34:46)


    上100-120ug就可以了，如果小点显色不明显可以适当在显色液中增加甲醛的量
    试一下。4-8段蛋白少，可能和提取方法有关

  • nvdabing (2014-6-19 13:35:04)


    谢谢你楼上朋友的建议，但是什么是增加加权的量，能不能说明白的点如何做。

  • orangecake (2014-6-19 13:35:23)


    那位仁兄说的应该是“甲醛”把！
    丙酮沉淀可以除去一部分的盐，但聚焦过程中也可通过设定程序来除盐！
    还有，银染的背景和一些小点的染出本来就是一个矛盾，有时候要根据你实验的需要取舍！
    不知道我说的对不，请各位大虾指正！

  • yes4 (2014-6-19 13:35:42)


    用Cleanup试一下应该能好一点
    上样前离心

  • yes4 (2014-6-19 13:36:04)


    转速可达5－6万g没有问题
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