【求助】大肠杆菌表达3小时量最大，后减小，原因何在？

最新回复

• zwsyrt (2014-6-19 16:52:30)

  首先是你的蛋白量下降的同时菌体（其他蛋白量）是否减少了？
  如果也减少了，有以下两种可能。
  IPTG有细胞毒性，会抑制菌生长甚至导致死亡，随着时间增长菌会裂解。即使你的IPTG浓度比较低，但随着表达异源蛋白的积累可能会导致细胞毒性，这也会导致菌体破裂，使获得蛋白量下降。
  如果总蛋白量没变，只是目标条带变弱了，有可能是异源蛋白激活了菌体的蛋白酶系统，导致蛋白迅速降解。
  另外30度表达蛋白，蛋白开始的表达速度会很快，此时蛋白降解速率小于表达速率，但是当蛋白浓度升高以后，蛋白降解速度加快，而表达速度由于细菌活力下降而降低，也会导致目标蛋白浓度下降。

• bluelake (2014-6-19 16:52:50)

  我的情况属于您所讲的第二类。不知您是否有相关的文献？这里我不是怀疑您，而是老板让我找到前人的试验，比较有说服力一些，还请赐教！如果不方便说，请PM我，我一直在线。谢谢您！

• qhyu (2014-6-19 16:53:29)

  
  ^_^，我个人认为，你不妨加大IPTG量5－10倍，诱导温度提高到37左右，我看对于p ET系统效果会很好。还有我个人比较倾向于用2－3mm的lactose，诱导温和，一般4－7h，诱导量大，不会出现明显的表达量减少。值得一试啊。

• bluelake (2014-6-19 16:53:48)

  你所说的诱导温和是什么条件呢？请赐教！

• am10 (2014-6-19 16:54:11)

  
  就是第二种情况了,其它的原因都是次要的.

• bluelake (2014-6-19 16:54:29)

  
  没有相应的参考文献，说服力始终感觉有点不强啊。