【求助】】SDS-PAGE蛋白样品积压在上层胶和下层胶分界...

最新回复

• wmp1234 (2014-6-21 09:38:17)

  
  我觉得像是目的蛋白样品的问题，有可能是样品太粘稠了或是有不溶性的东西，不易跑进分离胶。

• bs4665 (2014-6-21 09:38:36)

  
  可能是你加上层胶的时候之前没把压下层胶的水或酒精吸干净,导致上下两层胶之间形成比较厚的水带

• dog002 (2014-6-21 09:38:53)

  单看现象应该考虑有多聚体产生或者有其他不溶的大分子。既然后来跑正常了，应该是制胶的问题。

• fsdd817 (2014-6-21 09:39:13)

  QUOTE:

  原帖由 KGZ564 于 2014-6-21 09:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  昨天跑蛋白电泳，上层胶4%，PH6.8，下层胶15%，PH8.8，电泳结束后发现目的蛋白条带非常细，大部分都积压在上层胶和下层胶的中间，考染颜色很深，不知道是什么原因，今天又跑了一次，就比较正常了。
  问了很多人，大部分也都经历过这种情况， ...

  没有将分离胶的水封吸干净，就配了压缩，胶可能没有凝好的时候，就拔梳子不小心，将两层胶断开，结果样就跑不下去了。

• daod (2014-6-21 09:39:31)

  
  对两层胶中间有间隙,所以样品都积在中间了.以后操作的时候不要心急哦,祝你试验顺利!

• KGZ564 (2014-6-21 09:39:51)

  
  谢谢各位了
  但我可以肯定不是因为中间有间隙
  今天又跑了一次
  特别注意电泳的小心操作
  可是又发生了那种情况
  哎真是郁闷
  我觉得可能是样品的问题
  因为我跑的marker就没有滞留的问题
  但是样品是我从亲和层析下来的呀
  而且上样前也离心了的
  真不知道是怎么回事

• KGZ564 (2014-6-21 09:40:07)

  
  我在配上层胶之前就开始用滤纸吸水封的液体了
  到我配好上层胶肯定是吸的很干净了
  因为我特别注意了这一点

• remonte (2014-6-21 09:40:23)

  
  样品种目的蛋白分子量有多大？变性完全了吗？

• KGZ564 (2014-6-21 09:40:41)

  
  55kD,开水煮了5分钟

• KGZ564 (2014-6-21 09:41:04)

  
  为了验证是不是蛋白煮了之后聚集
  做了未煮的对照
  结果是基本一样的
  看起来未煮的或许还比煮过的强些

• daod (2014-6-21 09:41:24)

  
  55kda的蛋白跑10%的胶，您检查一下分离胶的pH值，重跑一次。

• dog002 (2014-6-21 09:41:51)

  
  15％胶浓度是不是太高了，大分子蛋白跑不下来