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【求助】乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题
文献上说来自电鳗的乙酰胆碱酯酶AChE (lyophilised powder; 292 U/mg solid; 394 U/mg protein),请问它的单位是什么意思啊?【求助】乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题
还有就是我如果购买500U/mg 的酶(或者是2000U/ mg) ,那么如何将它配制成1000U/mL的溶液呢?是直接用去离子水溶解还是其他什么缓冲液啊?
一般酶溶液制备后能存放多久呢?
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最新回复
DDD (2014-12-04 11:02:55)
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呵呵,非常感谢你的帮助!我明天正好就要去配酶溶液了呵呵,你的回复真及时真好~哈哈谢谢你!我已经明白啦!呵呵,以后我不偷懒了,得好好做实验好好查文献好好学习~(*^__^*) 嘻嘻……
pulala (2014-12-04 11:05:02)
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楼主,想请问下你,你是用什么溶液来配乙酰胆碱酯酶的母液,而且浓度多大比较合适啊?DDD (2014-12-04 11:05:27)
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10 U/mL储备液:将500 U/mg的AChE灰白色固体粉末用缓冲液A溶解,定容至50 mL量瓶中,摇匀即得;0.22 U/mL工作液:取220 μL的10 U/mL储备液,用缓冲液B溶解,定容至10 mL量瓶中,摇匀即得。
其中,缓冲液A:50 mM Tris-HCl,pH 8.0;
称取3.03 g Tris,精密称定,加入到375 mL去离子水中,在电磁搅拌下滴加浓盐酸至pH 8.0 (25℃),再向其中加入去离子水,定容至500 mL量瓶中,即得。
缓冲液B:50 mM Tris-HCl,pH 8.0,含有0.1%(w/v)牛血清白蛋白(BSA),用来稳定酶;
称取0.05 g BSA,精密称定后用缓冲液A溶解,定容至50 mL量瓶中,摇匀即得(注意BSA容易产生气泡,所以定容时不要剧烈振摇,要轻轻操作,防止产生气泡)。
DDD (2014-12-04 11:05:56)
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10U/mL的储备液我用具塞塑料试管分装后冻存于-20°冰箱中。feima+ (2014-12-04 11:06:22)
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楼主,虽然时间好久了,还是希望你可以帮忙解答一下,我发现你在缓冲液A中没有加小牛血清白蛋白呢,为什么不加到缓冲液A中,这样缓冲液B就不用每次稀释用的时候都加了啊DDD (2014-12-04 11:06:55)
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这个问题我没有具体探究,因为我也是参考了大量文献总结的实验方案。个人认为蛋白的冻存与复苏对酶有所影响吧!缓冲盐B在实验过程中稳定酶,在存放过程中就没有必要加入了。rxcc33 (2014-12-04 11:07:28)
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楼主,你配酶溶液时用的容量瓶是经过高温灭菌的吗?用的缓冲液A和B有没有灭菌呢?是过滤灭菌还是高温高压灭菌?我刚开始接触酶,实验室也没人用过,还请不吝赐教。ladyhuahua (2014-12-04 11:07:47)
DDD (2014-12-04 11:08:19)
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我没有灭菌,一直都是放冰箱冷冻起来的,现用现配。DDD (2014-12-04 11:08:39)
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普通蒸馏水,对水没有太多要求
eric930 (2014-12-04 11:09:03)
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楼主能否给我Q啊,我现在开始做酶的实验,想咨询几个问题,实验室没人做过,表示头很大啊66+77 (2014-12-04 11:09:31)
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容器什么的都不灭菌吗?这样会不会影响酶活,我也想着不灭菌呢,感觉灭菌有点麻烦,谢谢
DDD (2014-12-04 11:10:30)
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有空白对照就可以了,我看很多文献也没有提到严格灭菌。灭菌肯定更好更严谨了。
DDD (2014-12-04 11:11:07)
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多看点文献多实践就好了,我毕业好久没做酶实验
18856963259 (2022-6-30 20:38:45)
18856963259 (2022-7-03 16:41:07)
【求助】乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题