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【求助】乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题
文献上说来自电鳗的乙酰胆碱酯酶AChE (lyophilised powder; 292 U/mg solid; 394 U/mg protein)，请问它的单位是什么意思啊？【求助】乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题
还有就是我如果购买500U/mg 的酶（或者是2000U/ mg) ，那么如何将它配制成1000U/mL的溶液呢？是直接用去离子水溶解还是其他什么缓冲液啊？
一般酶溶液制备后能存放多久呢？
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最新回复
DDD (2014-12-04 11:02:55)
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呵呵，非常感谢你的帮助！我明天正好就要去配酶溶液了呵呵，你的回复真及时真好~哈哈谢谢你！我已经明白啦！呵呵，以后我不偷懒了，得好好做实验好好查文献好好学习~(*^__^*) 嘻嘻……
pulala (2014-12-04 11:05:02)
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楼主，想请问下你，你是用什么溶液来配乙酰胆碱酯酶的母液，而且浓度多大比较合适啊？DDD (2014-12-04 11:05:27)
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10 U/mL储备液：将500 U/mg的AChE灰白色固体粉末用缓冲液A溶解，定容至50 mL量瓶中，摇匀即得；0.22 U/mL工作液：取220 μL的10 U/mL储备液，用缓冲液B溶解，定容至10 mL量瓶中，摇匀即得。
其中，缓冲液A：50 mM Tris-HCl，pH 8.0；
称取3.03 g Tris，精密称定，加入到375 mL去离子水中，在电磁搅拌下滴加浓盐酸至pH 8.0 (25℃)，再向其中加入去离子水，定容至500 mL量瓶中，即得。
缓冲液B：50 mM Tris-HCl，pH 8.0，含有0.1%（w/v）牛血清白蛋白（BSA），用来稳定酶；
称取0.05 g BSA，精密称定后用缓冲液A溶解，定容至50 mL量瓶中，摇匀即得（注意BSA容易产生气泡，所以定容时不要剧烈振摇，要轻轻操作，防止产生气泡）。
DDD (2014-12-04 11:05:56)
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10U/mL的储备液我用具塞塑料试管分装后冻存于-20°冰箱中。feima+ (2014-12-04 11:06:22)
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楼主，虽然时间好久了，还是希望你可以帮忙解答一下，我发现你在缓冲液A中没有加小牛血清白蛋白呢，为什么不加到缓冲液A中，这样缓冲液B就不用每次稀释用的时候都加了啊DDD (2014-12-04 11:06:55)
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这个问题我没有具体探究，因为我也是参考了大量文献总结的实验方案。个人认为蛋白的冻存与复苏对酶有所影响吧！缓冲盐B在实验过程中稳定酶，在存放过程中就没有必要加入了。rxcc33 (2014-12-04 11:07:28)
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楼主，你配酶溶液时用的容量瓶是经过高温灭菌的吗？用的缓冲液A和B有没有灭菌呢？是过滤灭菌还是高温高压灭菌？我刚开始接触酶，实验室也没人用过，还请不吝赐教。ladyhuahua (2014-12-04 11:07:47)
DDD (2014-12-04 11:08:19)
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我没有灭菌，一直都是放冰箱冷冻起来的，现用现配。DDD (2014-12-04 11:08:39)
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普通蒸馏水，对水没有太多要求
eric930 (2014-12-04 11:09:03)
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楼主能否给我Q啊，我现在开始做酶的实验，想咨询几个问题，实验室没人做过，表示头很大啊66+77 (2014-12-04 11:09:31)
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容器什么的都不灭菌吗？这样会不会影响酶活，我也想着不灭菌呢，感觉灭菌有点麻烦，谢谢
DDD (2014-12-04 11:10:30)
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有空白对照就可以了，我看很多文献也没有提到严格灭菌。灭菌肯定更好更严谨了。
DDD (2014-12-04 11:11:07)
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多看点文献多实践就好了，我毕业好久没做酶实验
18856963259 (2022-6-30 20:38:45)
18856963259 (2022-7-03 16:41:07)
【求助】乙酰胆碱酯酶溶液的配制问题