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【求助】吸光度值A可以是大于1的吗？
我最近作了MTT,随毒性药物的作用，吸光度逐渐降低，我很高兴。【求助】吸光度值A可以是大于1的吗？
本以为行了，可是，在查文献是却发现，很多文献报的各组吸光度值A都是小于1的，而我的除了空白对照是小于1以外（0.05)，其余都是大于1的，在2.7--1.3之间，我的操作没有问题啊，而且重复2遍实验都是这样，波长是570nm。
我的结果怎么样？吸光度是怎么算的？A值从理论上讲，可以大于1么？
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最新回复
土坷垃 (2015-11-16 15:15:09)
可以大于1的，供参考。
cuturl('http://www.cbio21.com/ky/meibiaoyi/ascent.htm')
回复：请教：酶活性的测定及标准管的设置问题？ - 丁香园论坛
数值在在2.7--1.3之间，可能你的细胞数接种得比较多吧？
太大的话不在线性范围，误差较大。一般线性范围为0.2－0.7的。
niangao1980 (2015-11-16 15:15:26)
那我的结果还可以写文章么？会不会叫人笑话？
standup (2015-11-16 15:15:55)
bling (2015-11-16 15:16:12)
我也有问题要问，我是以每孔10000个细胞接种的，实验结果出来后，吸光度值都在0.02~0.07之间，可是很多文献都每孔4000个细胞接种，吸光度值却都接近1，我重复了n遍，吸光度值从没超过0.1,这是怎么回事?
ladyhuahua (2015-11-16 15:16:30)
不同种类的细胞表达的琥珀酸脱氢酶是不同的，并且增殖速度是不一样的，你的细胞可能增殖比较慢，实验这几天没有怎么长，所以应该把细胞密度再传高一些，是原代细胞吧？一般来书增殖都很慢的，所以你估计得提高一倍左右的细胞。不能完全按照书本操作的！
bling (2015-11-16 15:16:54)
我养的是肿瘤细胞，是买的细胞株，我在进行药物干预时根据文献上的方法先用无血清进行同步化，然后加药，配药时仍用无血清培养基，是不是跟细胞在无血清环境中不能增殖有关，96孔板可获细胞数大概是10的5次方，考虑到我的细胞在实验过程中只会凋亡，基本不增殖，我可不可以，以10的5次方个细胞进行接种，因为我已经接种到10000个了，吸光度值还这么低，我若继续以10000个接种，测出的吸光度值这么低有意义吗？能否用这个作为最后的实验结果？
bling (2015-11-16 15:17:39)
bling (2015-11-16 15:18:07)
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“96孔板可获细胞数大概是10的5次方”，那是针对Hela细胞而言，咱们一般的细胞的大小比Hela细胞大，所以估计减半吧。大概是5X10的四次方左右吧。
考虑你的肿瘤细胞不增殖，你可以接种10000－50000之间的细胞数。另外，不知道你最后做MTT孵育的时候是否用含血清的培养基，理论上孵育时的应该用含有2-8%左右血清的培养液孵育，有利于细胞吞噬MTT并将其转化(有文献专门报道过，具体原理记不清楚了)。
至于你最后得出负值，是不是你的本底孔没有做好，或者不干净？你再查查原因吧。
zzzz (2015-11-16 15:18:30)
BUK (2015-11-16 15:18:48)
BUK (2015-11-16 15:19:06)
还有，负值只是在空白空出现的吧，不影响的，跟酶标仪本身调零有关！我觉得你可以加大细胞数，而且最好能知道细胞生长的对数生长期！我一个同学做过对数生长期在第六才出现的细胞株！如果在对数生长期外加干预因素，我认为没什么意义！
bling (2015-11-16 15:19:18)
那如果我的 细胞对数生长期是传代后第三天，我是不是应该在第三天才开始进行同步化，我看有的文献上报道都是传代后第二天也没有同步化就直接加药干预，做出来的结果还挺好，不知是怎么做的
zzzz (2015-11-16 15:19:57)
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确实，很多实验室都是这么做的，结果也很好，也是认可的。
就是用含血清的培养液培养细胞，然后铺板，铺板24h后，直接用药物干预就行了，血清浓度不超过10%，最后直接加MTT就可以了。
zzzz (2015-11-16 15:20:15)
这样做出的结果会不会有太多漏洞？
bling (2015-11-16 15:20:53)
不过，如果你能更严格一些当然更好。不过，中间步骤太多了，同样也影响实验结果的。
zzzz (2015-11-16 15:21:08)
如果可以那我干脆也这么做得了，实验周期还缩短好几天，我这一段时间做的好不顺利，看到有这么多人帮我解决问题，心情好了不少，真的非常感谢大家的帮助！
bling (2015-11-16 15:21:31)
你不信去看看文献，大部分都是这么做的，同步化太麻烦了。MTT只是一个简单的实验，说明的问题也很有限，有些不值得。别的实验可以认真一点。
zzzz (2015-11-16 15:21:48)
我再问大家几个问题，测吸光度值所选波长与什么有关，我用570nm，你们用哪个波段的波长？还有一个96孔板，我用它来做时间梯度，在不同时间段终止反应，为了减少污染，我是等所有实验都做完了在一块加DMSO的，这样有影响吗？还有MTT我加了20ul/孔，DMSO加了150ul/孔，这样可以吗？MTT和DMSO的量要怎么计算？
zzzz (2015-11-16 15:22:05)
“MTT只是一个简单的实验，说明的问题也很有限，有些不值得。别的实验可以认真一点。”
确实如此，我也觉得不值，人家只做一次就出结果，我都做了十多次了，结果还是不尽人意，我真的好想哭，每次都是0.0几！
bling (2015-11-16 15:22:19)
没关系的，任何事情只要做了就会有收获的，哪怕是失败的事情。
任何失败的事情，只要不把责任推脱给外界因素，而是从自己身上找原因，那么你永远没有失败！
【求助】吸光度值A可以是大于1的吗？