查看完整版本请点击这里:
【求助】内参的Ct值高于目的基因的Ct值说明什么?
【求助】内参的Ct值高于目的基因的Ct值说明什么?
新手做qRT-PCR,迂到困难,请各位战友不吝赐教,不胜感谢!
质粒转染细胞后提取总RNA,反转录得到cDNA做模板,SYBR green法定量PCR,但发现内参(beta-actin)的Ct值高于目的基因的Ct。即目的基因先于内参达到平台期。
看了好多文献,内参都是先于目的基因达到平台期的。我却得到这样的实验结果,是不是哪里出问题了?还是本来就存在这种可能性?这是不是说明模板中目的基因含量比内参含量还高?可不可以认为目的基因在细胞中表达比较高?
查看完整版本请点击这里:
【求助】内参的Ct值高于目的基因的Ct值说明什么?
【求助】内参的Ct值高于目的基因的Ct值说明什么?
最新回复
youyou99 (2016-3-03 16:56:55)
woshi (2016-3-03 16:57:13)
有没有可能内参引物有问题(-20放了两年多了)?但已做过普通PCR,扩出的条带很好。
有没有战友的实验出现过这样的结果?
nn255 (2016-3-03 16:57:27)
你把cDNA稀释10倍,100倍再作下看看。
woshituzhu (2016-3-03 16:57:48)
对Trizol提RNA的原理不清楚,还请高手指点,不胜感谢!
woshituzhu (2016-3-03 16:59:25)
稀释10倍目的基因CT值:12.679
beta-actin CT值:19.128
稀释100倍目的基因CT值:15.899
beta-actin CT值:22.255
该怎样解释啊?困惑ing....................
wiwi (2016-3-03 16:59:40)
Did you use Dnase to treat the sample?
woshi (2016-3-03 16:59:55)
用过的战友可否提供点经验?
1.DNAase(RNAase free)购买哪个公司的产品好?除去DNAase外还要订别的试剂吗?因为在园子里看到还要用人胎盘RNA酶抑制剂,不用可不可以?
2.DNAase处理的具体操作步骤?
3.最后RNA大约会损失多少?
tuuu2 (2016-3-03 17:00:12)
我有两个基因的定量也遇到类似情况,但不是所有的样本表达量都高,但计算ΔCt值的时候应该怎么办呢?
hulu呼噜 (2016-3-03 17:00:29)
我也是这样情况,内参的Ct值高于目的基因的Ct值,是最近做实验遇到的,计算数据怎么办啊。。。好困惑@- @
yhtfyl (2023-2-24 07:36:59)
yhtfyl (2023-2-24 07:37:18)
【求助】内参的Ct值高于目的基因的Ct值说明什么?