【求助】内参的Ct值高于目的基因的Ct值说明什么？

最新回复

• youyou99 (2016-3-03 16:56:55)

  有这种可能的，如果你的目的基因本身的表达量非常高的话，会出现这种情况的。

• woshi (2016-3-03 16:57:13)

  但还有些疑惑，为什么没见过别的文献出现这样的情况呢？另外我的这个目的基因蛋白表达（相同的条件转染细胞提取蛋白做WB）却不高。是不是有点矛盾？
  有没有可能内参引物有问题（－20放了两年多了）？但已做过普通PCR，扩出的条带很好。
  有没有战友的实验出现过这样的结果？

• nn255 (2016-3-03 16:57:27)

  
  你把cDNA稀释10倍，100倍再作下看看。

• woshituzhu (2016-3-03 16:57:48)

  我用Trizol 法提取的细胞总RNA，有没有可能提总RNA过程中将细胞中的质粒DNA一起提出来？这样的话倒是可以解释目的基因CT值小于内参。
  对Trizol提RNA的原理不清楚，还请高手指点，不胜感谢!

• woshituzhu (2016-3-03 16:59:25)

  把cDNA稀释10倍，100倍后得到的结果依旧类似：
  稀释10倍目的基因CT值：12.679
  beta-actin CT值：19.128
  稀释100倍目的基因CT值：15.899
  beta-actin CT值：22.255
  该怎样解释啊？困惑ing....................

• wiwi (2016-3-03 16:59:40)

  
  Did you use Dnase to treat the sample?

• woshi (2016-3-03 16:59:55)

  我没有用DNAase，在园子里搜了一下，发现有的战友提倡用，有的不提倡。
  用过的战友可否提供点经验？
  1.DNAase(RNAase free)购买哪个公司的产品好？除去DNAase外还要订别的试剂吗？因为在园子里看到还要用人胎盘RNA酶抑制剂，不用可不可以？
  2.DNAase处理的具体操作步骤？
  3.最后RNA大约会损失多少？

• tuuu2 (2016-3-03 17:00:12)

  
  我有两个基因的定量也遇到类似情况，但不是所有的样本表达量都高，但计算ΔCt值的时候应该怎么办呢？

• hulu呼噜 (2016-3-03 17:00:29)

  
  我也是这样情况，内参的Ct值高于目的基因的Ct值，是最近做实验遇到的，计算数据怎么办啊。。。好困惑@- @

• yhtfyl (2023-2-24 07:36:59)

  感谢楼主分享，受教了

• yhtfyl (2023-2-24 07:37:18)

  感谢楼主分享，受教了