【求助】表达的质粒已经测序确认开放阅读框内序列没问题

最新回复

• yayayu (2016-4-02 12:53:01)

  目的蛋白要比预测的小4kD左右（目的条带约55kD）如果SDS-PAGE结果的话也不能说明真的小，SDS-PAGE出来的只是表观分子量，不是真实分子量。如果不符，可以利用质谱、凝胶排阻等确认。

• mimima (2016-4-02 12:53:20)

  这个质谱是不是跟分析化合物质谱差不多啊？凝胶排阻需要哪些东西啊？我们这条件有限，以前师兄师姐都不怎么做分子，所以对这方面了解较少……

• dadaai (2016-4-02 12:53:40)

  有点不一样，是飞行质谱。
  质谱和凝胶排阻都要蛋白纯化后做，凝胶排阻就是凝胶过滤，需要一些已知分子量的蛋白做为标准。

• 燕子@ (2016-4-02 12:54:03)

  楼主的那个预测蛋白分子量是怎么预测啊

• malong (2016-4-02 12:54:21)

  这位仁兄，你看电泳跑出的结果跟网上预测结果相差4kD~5kD,这属于正常范围吗？？？

• rrra6 (2016-4-02 12:54:40)

  正常，但最好别的方法验证下。

• rrra6 (2016-4-02 12:55:00)

  我也想验证啊，可是条件有限啊，你有什么简单易行的方法可以推荐一下吗？？？

• 燕子@ (2016-4-02 12:55:30)

  诱导表达后马上跑电泳

• jishiben (2016-4-02 12:55:55)

  Are you sure ?诱导表达做完天都黑了，在跑电泳我就要在实验室过夜了，请问诱导表达后马上跑电泳有什么理由吗?谢谢~

• 冰激凌 (2016-4-02 12:56:17)

  兄台，你看我这个分析的对不对，我的上样缓冲液里没有加β-巯基乙醇，但是目的蛋白氨基酸序列里含有半胱氨酸，是不是会形成二硫键使目的蛋白没有完全打开，最终导致跑出来的条带偏小？？？

• 美人鱼 (2016-4-02 12:56:40)

  如果是分子间形成二硫键，形成二聚体或多聚体，分子量会偏大；如果是分子内形成二硫键，分子量不变

• 跳跳哈里 (2016-4-02 12:57:01)

  学习了，不过分子形状对分子量大小也有影响吧，分子内形成二硫键应该体积变小，是不是分子量要相对小些？

• 冰激凌 (2016-4-02 12:57:39)

  我最近也出现了这种问题，请问楼主现在找到原因了么

• wwwh (2016-4-02 12:57:59)

  你好，正在做原核表达，想请问一下表达载体应该怎么选择尼？后期是要用纯化目的蛋白做抗体的，pET-22，pET-28，pET-30，我应该怎么选择尼？

• 燕子@ (2016-4-02 12:58:25)

  最近做表达，也出现了这个问题。蛋白一部分上清表达，一部分包涵体，上清为20KD，包涵体尿素溶解后只有14.用的PET28A载体，测序没有问题，实在不知道什么原因了