【求助】电泳所需蛋白质量

最新回复

• daod (2014-6-04 16:12:56)

  QUOTE:

  原帖由 dmg 于 2014-6-4 16:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我的蛋白质样品里只有2ul的蛋白质 请问这种情况下可以做电泳吗？

  太少了　

• dmg (2014-6-04 16:13:16)

  QUOTE:

  原帖由 daod 于 2014-6-4 16:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  太少了　

  
  那最少应该多少呢？
  我现在是按20ul的量加，能不能在SDS-PAGE的时候用30ul的量呢？

• 兔唇 (2014-6-04 16:13:38)

  
  可以加30µL，
  我一般用的是质量，而不是体积，建议采用每个加样孔应该有蛋白质20µg左右，体积应该低于40µL
  祝好运

• dmg (2014-6-04 16:13:55)

  
  谢谢楼上 我又算了一下 最多只有10ug左右 我用的抗体是IkB 这个抗体还算敏感吧

• wu11998866 (2014-6-04 16:14:19)

  
  上样量和你制的胶及电泳槽相关。一般用六一的Mini槽1cm的板的话加20ul比较合适，如果用大槽子和厚玻璃板的话可以增大上样量，具体量你可以提前试一下。蛋白质的量你能大致估计一下目的蛋白能有多少吗？不过如果你做Western的话，我觉得在量上不会太严格了，因为考染染不出来的情况也可能在ECL的时候看出来的，WB的灵敏度还是很高的。我们这边有过类似情况，目的蛋白的量很少，胶跑完后考染看不到，但是做玩WB后压片子出来结果很清晰的。这种情况下蛋白量反而不能太高。总之你自己试一下摸索一下条件，很easy的。祝好运。

• 3648755 (2014-6-04 16:14:38)

  
  一般上样量在12-15ug最好，正如kakeey 兄所说的，上样量看的是质量，而不是体积

• zsxan1990 (2014-6-04 16:15:02)

  
  我看分子克隆上说中等大小分子量的蛋白的Westerm 检出下限是1-5ng，按照含量为10的五次方分之一算的话，上样的总蛋白量最低应该是100ug呀？但是我也看到有前辈的资料说上样量不能查过50ug，所以一直不明白到底是怎么回事？
  谢谢指点迷津！

• yysr238 (2014-6-04 16:15:19)

  
  一般上样5－10ug，推荐10ug。也就是说，假如你的蛋白是1mg/ml的话，上10ul足已。

• IAM007 (2014-6-04 16:15:37)

  
  每空的上样量不可以超过20ug，但是如果上样量太少的话SDS－PAGE可能不会显示出明显的条带。

• 49888 (2014-6-04 16:15:55)

  
  视组织细胞的不同而有所差别，可以根据自己的目的蛋白查阅相应文献寻找相关信息。像我一个师姐所作上样仅要40ug以内就可以，而我做的上样量是她的几倍。我认为这应该根据自己具体情况预实验摸索适宜的上样量

• am10 (2014-6-04 16:16:12)

  
  我在试marker的时候，蛋白质质量用过100ng的，也可以看到的啊

• jrwyyplt (2014-6-04 16:16:32)

  我做的组织上样量在100ug以上才出得来目的蛋白。预实验时做几个上样梯度，找个合适的范围。