【求助】WESTERN的问题？

最新回复

• xiaoxiaoniao (2014-6-08 17:15:16)

  
  详情参见分子克隆实验指南
  简单的说，变性是为了使得蛋白质在电泳时的分离只与它们的分子量有关。
  我知道的蛋白质电泳前都要变性，我一般用95-100度来变性，15分钟

• bring (2014-6-08 17:16:01)

  变性是为了让蛋白和SDS结合，这样所以得蛋白都带上了同样的负电荷，让电泳迁移只和蛋白的分子量有关，这样才能利用分离胶分离出不同大小的蛋白，一般变性的温度100度5分钟左右

• 8princess8 (2014-6-08 17:16:30)

  
  弱弱地问一句：变性后为何抗体还能与之结合？我是指后继的检测！
  一直没有搞明白！

• 831226 (2014-6-08 17:18:31)

  变性应该是把蛋白的二、三级结构破坏了，但是不会破坏蛋白的一级结构。
  抗体识别的是蛋白上的特异片断，或者氨基酸。
  所以蛋白变性后还能和抗体结合

• 8princess8 (2014-6-08 17:19:02)

  也就是说，一抗用的是针对线性片段 的抗 体。不是那种针对空间结构的？

• 831226 (2014-6-08 17:19:30)

  应该是的

• 04906 (2014-6-08 17:20:51)

  我想请教一下关于WB具体流程以及原理的介绍资料，
  
  在此将不胜感激!

• 9900 (2014-6-08 17:21:13)

  
  对于为什么要变性各楼已经解释很清楚了
  这里回答另外 的问题。
  并不是所有的蛋白都要变性，看你的要求，也有非变性的sds－page
  非变性的蛋白电泳，蛋白迁移率还跟蛋白质形状有关，而变性后只与大小有关，某些蛋白质，变性后电泳跟非变性电泳比起来，条带少了，因为变性后同样一级结构的蛋白电泳时就没有差别了。
  变性以后，二级，三级，四级结构改变，但是一级结构不会改变，抗原的表位还在，可以被抗体识别，一样有免疫原性。