最新更新主题

月度关注热点

【求助】Western blot

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-6-09 16:36    作者: XYZQ    来源: 分析测试百科网

查看完整版本请点击这里：
【求助】Western blot

我的实验是分子量为75KD的蛋白，用半干恒压砖膜法（电压是15V），用了一个小时，但是里春红染色没有显影（一个点都没有），实验结果也是没有显影。是什么原因啊？真郁闷！求各位大侠给予指点！！
查看完整版本请点击这里：
【求助】Western blot

我也来说两句 查看全部回复

最新回复

  • shenkunjie (2014-6-09 16:36:37)

    首先看看是不是自己操作的问题，设备是不是装的对不对。
    然后检查一下电泳缓冲液。

  • yychen (2014-6-09 16:36:54)


    感觉转膜的时间和电压都不够，估计是没转过去

  • 33号 (2014-6-09 16:37:12)


    丽春红染不出来可能是转膜没有成功吧。你用什么转印仪器？我们实验室用的是Bio-rad的半干转印仪，常规都是用25v恒压转印30 min，75kd没有问题。

  • XYZQ (2014-6-09 16:42:18)


    我们实验室用的也是 Bio-rad的半干转印仪，我想问一问：转膜时间和膜的大小有没有关系？

  • remenb (2014-6-09 16:42:46)


    应该和膜的大小没关系，和蛋白的量以及大小有关

  • am10 (2014-6-09 16:43:03)

    我也遇到了同样的问题,电泳后,考染时,蛋白挺好的,但是丽春红染了只能看出泳道的形状,不能成条带,只有小分子蛋白成条带,显影后结果也不行,请教各位,我该如何改下条件呢?

  • 3N4G (2014-6-09 16:43:21)


    如果小分子量蛋白成条带而大分子量的蛋白没有条带，那就说明转膜的时间过短或是电压过小，如楼主为例，110KD的蛋白， 只转一个小时，很有可能是还没有转到膜上，可以增长时间试试。

  • am10 (2014-6-09 16:43:44)


    谢谢了,上批的实验出条带了,但背景有些深,抗体浓度是按说明书走的,曝光时间选了30SEC和1MIN,还是深,今天把抗体浓度调低了,还不知道结果呢,您能给些建议吗?
    谢谢了先!

  • xiaoxiaoniao (2014-6-09 16:44:10)


    背景深，可以先降低二抗的浓度试试看。TBST10 min 4 times or 3 times.
    祝你好运！

  • XYZQ (2014-6-09 16:44:30)


    其实，丽春红能够染上色，对于蛋白的量要求比较多，别忘记了

  • Ao7 (2014-6-09 16:44:59)


    我用BIO-Rad半干转移仪转60kD，用恒压10-15v，电流大概控制在200mA左右 ，50-60min挺好。我一般不考虑面积的。
查看全部回复 我也来说两句
查看完整回复请点击这里：
【求助】Western blot