【求助】marker跑成这样是何原因，为何sds-PAGE下半部...

最新回复

• rxcc33 (2014-6-09 18:07:50)

  
  如果你的样品和marker是用同一样品缓冲液处理的话，就是你marker本身的问题了，因为样品跑得很好，这可排除是胶的问题．建议换另一批marker一试．

• babybabe (2014-6-09 18:08:12)

  
  我也出现了这种情况，不知是什么原因，所有的溶液重配了还是不行，都快两个月了，始终跑不出一张好的电泳图，我都快说tmd的了，有人说是阳极的原因，我检查过也没问题，只剩下样品的问题了，可是我以前处理的样品都没问题，一直到胶的下缘，条代都是清晰的，见鬼了！现在我正在改变处理样品的方法。有新情况会及时联系！

• xue258 (2014-6-09 18:08:37)

  
  跑SDS-PAGE 带有一定的随机性，会有时跑的好，有时跑的差，所以需摸出一定的条件。当将一切条件稳定后，条带就会一直跑的很漂亮，而且，也不会再让人繁心了。
  1. 从图上看出，你好象是做原核表达。如果是的话，我可以说你的蛋白表达没有问题，目的条带也很清楚，分开的层次还行。
  2. 胶的配置问题
  我不知道你的胶的配方，如果配方问题排除的话，那就是实验操作原因。
  比如说：你的MARKER上样孔处是否排除了气泡，是否样品混合均匀。如果有气泡的话，影响MARKER的 分辨率。
  3.加样量
  很明显，你的第二个MARKER 加样时已经漫出加样孔了，所以会有波浪形。
  4.MARKER有拖尾现象，考虑胶的配置问题，电压高低。
  5.我在做的时候，蛋白MARKER的最下面两条带一直很模糊，具体的原因我也在考虑中，可能原因是MARKER 降解了（它也是蛋白质啊）
  呵呵！大家一起来讨论啊！

• qianqin1977 (2014-6-09 18:08:55)

  你灌胶之前是否把玻璃板洗干净了（也许玻璃板不干净导致胶灌的不均匀）， 我每次都用洗涤剂把玻璃板洗干净，后用95%酒精擦拭，晾干。
  你的marker是不需要处理直接上样的吗？也许marker时间久了，成分有变化。

• woshiduiyan (2014-6-09 18:09:16)

  
  谢谢各位的建议，我的玻璃板只是用洗手液清洗后用超纯水冲洗，晾干的。也很干净，应该不是这方面的原因吧。

• ending (2014-6-09 18:10:19)

  
  1. stacking gel 的浓度是否过高？4%试试。
  2. 电压过高？100V，40mA.

• dog002 (2014-6-09 18:10:38)

  
  1.同意楼上，可能电压过高。
  2，胶体凝结不均匀，可仔细看看胶体的配方