【求助】用荧光显微镜观察细胞膜上抗原抗体的结合

最新回复

• BUK (2014-6-09 18:20:20)

  不必的，可以在ep管里与一抗或二抗反应，细胞核（DAPI）染色后，加一些抗退色封片剂，染色后最后在把细胞悬液加在载玻片上，盖上盖玻片，用指甲油或玻璃胶固定一下就可以在荧光显微镜下观察了。
  一抗一般可以在室温下1~2h就可以，也可4度时间长一些，视抗体的情况而定。可以参见《细胞实验指南》

• cocacola (2014-6-09 18:20:41)

  
  谢谢楼上的，那如果要使悬浮细胞贴壁，常用的方法试剂有哪些呢？

• ending (2014-6-09 18:21:31)

  不必的，可以在ep管里与一抗或二抗反应，细胞核（DAPI）染色后，加一些抗退色封片剂，染色后最后在把细胞悬液加在载玻片上，盖上盖玻片，用指甲油或玻璃胶固定一下就可以在荧光显微镜下观察了。
  一抗一般可以在室温下1~2h就可以，也可4度时间长一些，视抗体的情况而定。可以参见《细胞实验指南》
  
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  你好，看到你在这里的回复帖子。我也想做悬浮细胞的免疫荧光电镜。
  细胞染色后，你提到用抗退色封片剂。不知道这个抗退色封片剂是什么东西？在实验室常用吗？
  你在封片时候提到用指甲油，或者是玻璃胶固定。请问指甲油是我们女士用的那种指甲油就可以了吗？不会影响荧光结果观察吗？
  因为细胞已经长成需要答案，希望能得到你的帮助。

• BUK (2014-6-09 18:21:53)

  
  抗退色封片剂主要是想延缓荧光退色的速度，尽量延长对细胞或组织的地观察时间，对于实验完成后立即拍照来说，不用也可。
  主要有两种：甘油抗退色封固液和N-丙基没食子酸抗退色液
  甘油抗退色封固液配方：
  N-丙基没食子酸 5g
  DABCO 0.25g
  p-对苯二胺 2.5mg
  甘油 100ml溶解加氢氧化钠调至中性，分装于-20度保存
  N-丙基没食子酸抗退色液：用甘油配制2%的 N-丙基没食子酸，调至PH8.0
  也可以买到
  另外，我们在2抗洗涤后直接用1~10微克/毫升溶于50%的甘油+50pbs中5分钟后观察，也不错的
  指甲油和胶主要在载玻片的4个角涂一点固定，以免滑动，不会影响荧光，胶好些，可以回收载玻片，指甲油不可以的。
  就是女士用的就可以

• cocacola (2014-6-09 18:22:14)

  我的悬浮THP-1细胞用多聚赖氨酸使之贴壁效果很差啊，用PBS轻轻一洗细胞就掉了，郁闷，不知各位大侠有什么其他好的办法让THP-1贴壁的。听说用四型胶原也可，不知效果好吗？

• cocacola (2014-6-09 18:22:49)

  我的悬浮THP-1细胞用多聚赖氨酸使之贴壁效果很差啊，用PBS轻轻一洗细胞就掉了，郁闷，不知各位大侠有什么其他好的办法让THP-1贴壁的。听说用四型胶原也可，不知效果好吗？