【求助】western blot为何连内参都没有条带

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• yes4 (2014-6-10 09:47:44)

  
  蛋白有问题没有啊
  不同大小的蛋白跑胶和转膜都是不同的
  16kd是有点小了
  你的膜的孔径是多大啊，胶的浓度呢,转膜什么条件？
  不过你内参（不知道你内参是什么）不出我认为主要还是蛋白和抗体的问题，你用别人的蛋白跑一下，或者用好用的抗体试一下，看看问题到底在哪里
  good luck!!!!!!

• zhenxin (2014-6-10 09:48:09)

  我的胶是12%，电泳后做考染有清楚的条带，蛋白应该没问题，ＰＶＤＦ膜的孔径是0.45,转膜是是湿转105mA,３个小时，我的内参是47kD的贝它-actin.

• yes4 (2014-6-10 09:48:34)

  别的应该问题不大
  看来很有可能是出在转膜和抗体上面了
  你转膜后用丽春红染一下，看看相应大小的蛋白是否转到膜上了
  如果转膜没问题的话，就是你杂交有问题
  看看你的杂交条件，尤其是抗体的稀释倍数和你抗体的效价是否合适
  good luck!!!!

• gogo (2014-6-10 09:48:56)

  
  还是想办法验证一下你的抗体吧，我们同学western做了两个月，也什么都没出，一项一项的排除，最后查明就是因为试剂公司把抗体给搞错了！
  虽然试剂公司把抗体给换了，但其他方面的损失也不小呀！

• gemei0115 (2014-6-10 09:49:15)

  一是抗体：一抗和二抗的质量都很重要（是否匹配）；二是化学发光试剂的质量，最好是进口的。

• ero11 (2014-6-10 09:49:34)

  
  你蛋白样的浓度是不是太低了，可以加大一下上样量试试。另外β-actin应该是43KD吧。

• zhenxin (2014-6-10 09:51:07)

  
  原来是我买的发光剂和二抗不行,换了这两样就做出来了,非常感谢楼上各位!